[发明专利]一株高产重组蛋白的酵母基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株酵母基因工程菌，其特征在于：是对酵母出发菌株进行以下任一种操作后得到：

(1)敲除CBC1基因、敲除RRP6基因和弱化Ypt1p的表达；或

(2)敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、弱化Ypt1p的表达和强化蛋白激酶Kin1p的表达；或

(3)敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、弱化Ypt1p的表达、强化蛋白激酶Kin1p的表达和增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量；或

(4)敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、弱化Ypt1p的表达、强化蛋白激酶Kin1p的表达、增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量和强化磷酸肌醇3-激酶Vps34p的表达；或

(5)敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、弱化Ypt1p的表达、强化蛋白激酶Kin1p的表达、增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量、强化磷酸肌醇3-激酶Vps34p的表达以及强化二硫键异构酶Pdi1p和内质网金属蛋白酶Ste24p的表达；

所述的弱化Ypt1p的表达是将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p；

所述的强化蛋白激酶Kin1p的表达是将KIN1的启动子替换为强启动子TEF1p；

所述的增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量是增加后HAC1 mRNA 3’BE元件的数量为2；

所述的强化磷酸肌醇3-激酶Vps34p的表达是将VPS34的启动子替换为强启动子TEF1p；

所述的强化二硫键异构酶Pdi1p和内质网金属蛋白酶Ste24p的表达是将核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的ADH1t-PDI1-TEF1p-PGK1p-STE24-CYC1t整合至CBC1基因座上；

所述的酵母出发菌株为酿酒酵母。

2.根据权利要求1所述的酵母基因工程菌，其特征在于：所述的酵母基因工程菌还含有具有编码重组蛋白基因的表达质粒。

3.根据权利要求1所述的酵母基因工程菌，其特征在于：所述的酵母出发菌株为酿酒酵母IMX581。

4.酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)敲除酵母出发菌株上编码磷酸丙糖异构酶的基因TPI1，构建得到菌株Y1；

(2)对菌株Y1进行以下任意一种操作，得到所述的酵母基因工程菌：

1)在菌株Y1的基础上敲除CBC1基因、敲除RRP6基因和将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p；或

2)在菌株Y1的基础上敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p和将KIN1的启动子替换为强启动子TEF1p；或

3)在菌株Y1的基础上敲除RRP6基因、敲除RRP6基因、将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p、将KIN1的启动子替换为强启动子TEF1p以及增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量使增加后HAC1 mRNA 3’BE元件的数量为2；或

4)在菌株Y1的基础上敲除CBC1基因、敲除RRP6基因、将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p、将KIN1的启动子替换为强启动子TEF1p、增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量使增加后HAC1 mRNA 3’BE元件的数量为2以及将VPS34的启动子替换为强启动子TEF1p；或

5)在菌株Y1的基础上敲CBC1基因、敲除RRP6基因、将YPT1的启动子替换为弱启动子CYC1p、将KIN1的启动子替换为强启动子TEF1p、增加HAC1 mRNA 3’BE元件数量使增加后HAC1 mRNA 3’BE元件的数量为2、将VPS34的启动子替换为强启动子TEF1p以及将核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的ADH1t-PDI1-TEF1p-PGK1p-STE24-CYC1t整合至CBC1基因座上；

所述的酵母出发菌株为酿酒酵母。

5.根据权利要求4所述的酵母基因工程菌的构建方法，其特征在于：

所述的酵母出发菌株为酿酒酵母IMX581。