[发明专利]一种李属资源分子标记及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，公开了一种李属资源分子标记及其应用，李属资源包括大石早生、五月脆、好莱坞和冰糖李，分子标记为DNA条形码，DNA条形码为叶绿体rbcL‑accD基因间隔区的序列，还公开了应用，分子标记用于鉴定不同李属资源品种，还公开了一种李属资源的鉴定方法；本发明利用叶绿体rbcL‑accD基因间隔区进行引物设计，设计出的引物对经过PCR扩增后产物的碱基序列差异进行鉴定，可以直接获得鉴定结果，实现不同李属资源品种的快速鉴定，检测准确性高、可重复性高以及鉴定时间短。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体一种李属资源分子标记及其应用。

背景技术

李是蔷薇科、李属植物，广泛分布于世界各国，也是我国重要的传统果树之一。李果实富含类胡萝卜素、维生素和花色苷等生物活性物质，具有预防多种疾病的功效，深受消费者喜爱。我国李属资源极其丰富，李品种数量繁多，随着育种水平的提高，大量优质地方品种被成功选育，我国李种质资源极其丰富，李品种数量繁多，命名不科学，同名异物或同物异名的现象十分严重，严重阻碍了李种质资源的开发利用。因此，通过系统的研究，完善品种资源分类，对李种质资源的收集、保存和利用具有十分重要的意义。

近年来，DNA条形码对物种进行分类鉴定已经成为一种准确高效的方法，DNA条形码技术是利用标准的、具有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段在物种内的特异性和物种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统，可实现对物种的快速自动鉴定；该技术已被成功应用于生物物种分类和鉴定等领域，并成为进展最迅速的学科前沿之一，且由于植物叶绿体基因组进化速率较快、单性遗传等特点，适合用来筛选植物DNA条形码以对同类植物资源加以鉴定。

发明内容

基于以上问题，本发明提供一种李属资源分子标记及其应用，本发明通过实验，以叶绿体基因组为基础，筛选设计出了一对高质量的引物序列，根据基因测序结果有效鉴定区分四种李属资源大石早生、五月脆、好莱坞和冰糖李，并通过三次重复试验及不同产地的材料验证，证明该引物对鉴定四种李属资源的可行性。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种李属资源分子标记，所述李属资源包括大石早生、五月脆、好莱坞和冰糖李，所述分子标记为DNA条形码，DNA条形码为叶绿体rbcL-accD基因间隔区的序列，其序列为SEQ ID NO.1。

为解决以上技术问题，本发明还提供了一种李属资源分子标记的应用，所述分子标记用于鉴定不同李属资源品种，所述分子标记利用叶绿体rbcL-accD基因间隔区的序列设计引物对。

为解决以上技术问题，本发明还提供了用于鉴定不同李属资源品种的引物对，所述引物对序列为：

Flz006(上游引物序列)：5’AGGATTGAGCCGAATACAATAA3’(SEQ ID NO.2)；Rlz006(下游引物序列)：5’AAACGCAGGATCAGGATATAAT 3’(SEQ ID NO.3)。

为解决以上技术问题，本发明还提供了一种李属资源的鉴定方法，包括如下步骤：

(1)提取待测李属资源样品的基因组DNA，每个李属资源样品各取三份；

(2)利用设计出的引物对进行PCR扩增，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

(3)对扩增产物进行测序，对测序结果比对分析后，通过碱基序列的差异进行鉴定；

进一步的，步骤(2)所述的PCR扩增，其反应体系为25μL：DNA模板2μL、上游引物1μL、下游引物1μL、PCR SuperMix(+dye)12.5μL和ddH2O8.5μL；其反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃修复延伸5min，保存。