[发明专利]一种利用分子检测刺芋尖孢镰刀菌的方法

权利要求书

1.一种利用分子检测刺芋尖孢镰刀菌的方法，其特征在于，包括：

S1、对健康刺芋植株提取刺芋健康DNA，得到空白对照DNA组；

S2、对染病刺芋植株提取刺芋病株DNA，得到病株DNA组；

S3、对所述病株DNA组进行测序后合成DNA序列，得到病株DNA序列；

S4、根据在GenBank的尖孢镰刀菌种群及其他不同种属镰刀菌的基因组片段设计ITS序列；

S5、对所述ITS序列进行对比分析后得到特异性引物I1，特异性引物I2；

S6、将所述空白对照DAN组、所述特异性引物I1以及所述特异性引物I2进行RAA等温扩增反应得到第一扩增产物；

S7、将所述病株DNA组、所述特异性引物I1以及所述特异性引物I2进行RAA等温扩增反应得到第二扩增产物；

S8、通过电泳检测所述第一扩增产物和所述第二扩增产物是否存在特异性单一条带出现；

S9、若是，则确定所述染病刺芋植株的基因组片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中将所述健康刺芋植株进行消毒后放置于液氮预冷的研钵中研磨得到健康刺芋植株粉末，将所述健康刺芋植株粉末置于1.5ml的EP管中，通过核酸提取试剂盒进行DNA提取，得到空白对照DAN组并放置于-20℃保存。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中将所述染病刺芋植株进行消毒后放置于液氮预冷的研钵中研磨得到染病刺芋植株粉末，将所述染病刺芋植株粉末置于1.5ml的EP管中，通过核酸提取试剂盒进行DNA提取，得到病株DNA组并放置于-20℃保存。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S6和步骤S7中，等温扩增反应的条件为，预混时间：20s,温度：39.2℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S9之后所述方法还包括，将所述病株DNA组进行灵敏度检测，所述灵敏度检测用于确定所述病株DNA组的浓度最低限值。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，按照预设浓度稀释所述病株DNA组的浓度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将预设浓度稀释所得的病株DNA组进行RAA等温扩增反应，得到扩增产物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增产物通过电泳所得的电泳条带确定所述浓度最低限值。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述预设浓度包括50ng/μL、25ng/μL、10ng/μL、5ng/μL、1ng/μL、500pg/μL、100pg/μL、50pg/μL。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S5中所述ITS序列通过vector NTI及Primer 6软件进行对比分析后得到特异性引物I1，特异性引物I2。