[发明专利]一种水稻异源胞质育性恢复QTL qRf5.1的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种水稻异源胞质育性恢复QTL qRf5.1的分子标记，其特征在于，包括调控水稻异源胞质育性恢复的主效QTL，所述主效QTL位于水稻第05号染色体上，命名为qRf5.1；区间遗传距离为104.8cM～110.6cM，物理距离为21,378,343～22,671,210bp；

还包括用于检测与异源胞质不育育性恢复的主效QTLs的SSR引物对RF01，所述引物对RF01具有下述1)～3)任一项核苷酸序列之一：

1)所述引物对RF01中上游引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述引物对RF01中下游引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

2)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；

3)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且能扩增出水稻育性恢复相关基因的序列；

RF01-F：5'-GAGTGGAAATGGCACTTA-3'(SEQ ID NO.1)

RF01-R：5'-ATTTCACCTCCCTCATCT-3'(SEQ ID NO.2)。

2.根据权利要求1所述的水稻异源胞质育性恢复QTL qRf5.1的分子标记，其特征在于，用于检测SSR分子标记的引物对RF01在制备用于检测或辅助选择水稻育性恢复基因qRf5.1的试剂盒或PCR试剂中的应用；所述试剂盒或PCR试剂包括权利要求1所述的引物对RF01。

3.根据权利要求2所述的水稻异源胞质育性恢复QTL qRf5.1的分子标记，其特征在于，所述试剂盒或PCR试剂还包含有PCR技术常用的试剂。

4.根据权利要求3所述的水稻异源胞质育性恢复QTL qRf5.1的分子标记，其特征在于，所述的试剂盒或PCR试剂在检测水稻异源胞质育性恢复基因qRf5.1和/或在水稻恢复系分子标记辅助选择育种中的应用。

5.一种检测水稻育性恢复分子标记辅助育种方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)提取待测水稻样品基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物对RF01进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；

(3)将步骤(2)得到的PCR扩增产物进行浓度为6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果该待测水稻样品扩增出大小为202bp的条带，则该待测水稻携带异源恢复育性基因qRf5.1的水稻品系或候选的育性恢复基因水稻品系。

6.根据权利要求5所述的检测水稻育性恢复分子标记辅助育种方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的反应体系为：2×Tolo FastTaq Premix 5.0μl，10pmol/μl的权利要求1引物对RF01 1μl，300-500ng/μl的水稻基因组模板DNA 1μl，加灭菌后的超纯水至10μl。

7.根据权利要求5所述的检测水稻育性恢复分子标记辅助育种方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，循环35次；最后72℃延伸10min；扩增产物在4℃下保存。

8.根据权利要求5-7任意一项所述的检测水稻育性恢复分子标记辅助育种方法，其特征在于，所述的水稻携带育性恢复基因qRf5.1。