[发明专利]一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂

权利要求书

1.一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，包括实验器材和试剂，其特征在于：所述实验器材包括有超净工作台、培养箱、摇床、冰箱、PCR仪、pH计、琼脂凝胶电泳仪、离心机、超低温冰箱、SQ810C-高压蒸汽灭菌器、MJM-508霉菌培养箱，酶标仪、DNA提取试剂盒、2216C-培养基和PDA-培养基，所述试剂包括有Ta酶、dNTP、37.4g2216C培养基粉末、蒸馏水、15g琼脂粉、马铃薯200g薄片、20g葡萄糖、20g琼脂。

2.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：所述2216C-培养基：取出37.4g 2216C培养基粉末添加蒸馏水定容至1L，固态培养基加15g琼脂粉，混合均匀后，121℃灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：所述PDA-培养基：马铃薯200g薄片加400ml水煮沸30min，取汁加入20g琼脂，加热融化，定容至1L，pH值保持限定，自然分装，并带动分装后的PDA培养基121℃消毒杀菌20min。

4.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：样品采集与处理：样品采集与三组密闭舱室，三组密闭舱室为两两一组，样品采集中所有器材浸泡在75％的酒精中，盛放样品的容器均放置在121℃高压蒸汽灭菌容器内，容器放置20min。

5.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：微生物的鉴定包括有取新细菌菌液1-2mL至2mL离心管中，10000rpm高心1min，弃上清；向离心管中加入200uL缓冲液GA，轻微震荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向离心管中加入4uL RNasecA溶液，震荡15s，室温放置5min，向离心管中加入20uLProteinase K溶液，翻装离心管使其混匀，向离心管中加入220uL缓冲液GB充分震荡15s，70℃水浴10min左右，向离心管中加220uL无水乙醇，震荡混勾15s，将离心管中液体特移至吸附柱中，12000rpm离心1min，弃离心液，向吸附柱中加入600uL加过无水乙醇的缓冲液GD。12000rpm高心1min，弃离心液，向吸附柱中加入600uL加过无水乙醇的漂洗液PW，2000rpm离心1min，弃离心液。将吸附柱放置离心机中，13000rpm离心2min，弃掉残留的离心液，吸附柱室温放置10-20min，以充分去除残留的乙醇，将超纯水加热至60℃，向吸附柱中间部位悬空滴加30uL，室温放置2min，13000rpm离心2min，最后析出细菌基因DNA。

6.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：嗜盐单胞菌和黑曲霉菌的制备方法包括有：嗜盐单胞菌菌种的活化及菌液的制备，菌种从超低温冰箱中取出，菌种进行40℃解冻100s，所述菌种加入30ml液体培养基中，菌种放置在37℃，150r/min摇床内24h；黑曲霉菌种的活化；超低温冰箱中取出黑曲霉菌，所述黑曲霉菌放置在4℃冰箱中2h，所述黑曲霉菌取出放置在PDA平板上，所述PDA平板控制在28℃保持3-4d。

7.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：杀菌剂研发及性能评价包括有：杀菌剂选用季铵盐类、卤铵盐类和聚六亚甲双胍盐酸类；嗜盐单胞菌杀菌性能评价：用已灭菌的琼脂打孔器在试验平板上打开，将圆孔外部的培养基小块去除，原理内部注入80uL杀菌剂溶液。

8.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：杀菌剂放置在316L不锈钢材质的喷壶盛装和喷洒，所述喷壶的外部安装有磁铁或挂钩。

9.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：三种典型杀菌剂对嗜盐单胞菌生长影响，分别将杀菌剂的浓度控制在1g/L。

10.根据权利要求1所述的一种用于特定密闭舱室空间内致霉微生物消杀的新型杀菌剂，其特征在于：模拟杀菌剂的使用情况；所述喷雾器每次最大可喷出10uL药液，实验平板直径90mm，每个平板喷涂200uL。