[发明专利]一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，尤其为一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法，包括以下步骤：S1，对宫颈细胞样本进行提取处理得到细胞DNA样本，接着对细胞DNA样本进行重亚硫酸盐快速转化，得到转化产物；S2，对转化产物进行酶切处理，得到酶切产物，再对得到的酶切产物进行PCR扩增，得到PCR扩增引物组；S3，对PCR扩增引物组进行实时荧光定量PCR检测，并计算出甲基化程度，本发明可以有效解决目前采用的宫颈癌常规筛查技术着存在操作繁琐、准确性低及敏感性不高的缺点，限制了其在临床实验室的广泛应用的问题。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体为一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法。

背景技术

高危型人类乳头瘤病毒的持续性感染是宫颈癌的病因，但宫颈上皮的癌变过程还包括许多基因和表观基因的改变，DNA甲基化是最常见的表观遗传改变，常发生于肿瘤抑制基因的启动子区域，造成该基因的转录失活，从而促使肿瘤的发生，现有文献报道的宫颈癌中可检测到DNA甲基化，且可见于30％～80％的宫颈癌前期病变中，已有研究表明，检测宫颈脱落细胞中特定基因的甲基化可能作为潜在的分子标志物用于宫颈癌的早期检测。

目前采用的宫颈癌常规筛查技术着存在操作繁琐、准确性低及敏感性不高的缺点，限制了其在临床实验室的广泛应用。

综上所述，本发明提供一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种宫颈癌相关基因甲基化检测方法，包括以下步骤：

S1，对宫颈细胞样本进行提取处理得到细胞DNA样本，接着对细胞DNA样本进行重亚硫酸盐快速转化，得到转化产物；

S2，对转化产物进行酶切处理，得到酶切产物，再对得到的酶切产物进行PCR扩增，得到PCR扩增引物组；

S3，对PCR扩增引物组进行实时荧光定量PCR检测，并计算出甲基化程度。

作为本发明优选的方案，所述S1中提取处理的具体操作步骤为：

S11，将宫颈细胞样本送入离心机中进行离心处理，处理结束后移除上清液，得到样本沉淀物；

S12，将样本沉淀物、蛋白酶K和裂解液ABL混合，混合均匀后进行孵育，得到样本DNA，孵育的时间为45min-50min，所述孵育的温度为55℃-58℃。

作为本发明优选的方案，所述S1中重亚硫酸盐快速转化的具体操作步骤为：

S21，将NaHSO3和(NH4)2SO3·H2O溶于6.5ml(NH4)HSO3溶液中，加热至90℃至完全溶解，冷却至室温，检测溶液的pH应在5.4–5.5，得到转化液；

S22，将细胞DNA样本加入55ul转化液中，在85℃下处理15min，冷却至室温，得到转化产物。

作为本发明优选的方案，所述S2中酶切处理使用的是限制性内切酶反应液，且限制性内切酶反应液由限制性内切酶和限制性内切酶酶切缓冲液混合制成。

作为本发明优选的方案，所述PCR扩增引物组包括目标基因引物组、目标基因引物组的上游引物以及目标基因引物组的下游引物。

作为本发明优选的方案，所述S3的具体操作步骤为：

S31，以dTTP、dGTP、dATP以及第三标记物作为底物，将PCR扩增产物组加入到固定有亲和素受体的酶标板中，使PCR扩增产物通过第三标记物与亲和素受体的作用固定到酶标板上；