[发明专利]一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、试剂盒及其应用。所述CDA引物组为针对白假丝酵母菌的保守区片段扩增的引物组，为引物对CA‑F2/CA‑R2、CA‑LF/CA‑LR和引物对CA‑MF/CA‑MR，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示。本发明提供的方法或试剂盒无需昂贵的仪器、也无需复杂的操作就可完成对白假丝酵母菌的快速准确检测，因此，适用于专业程度不高的机场、海关、口岸、社区等地的现场快速检测。本发明所提供的可视化试剂盒将为现场检测提供极大便利，可实现对白假丝酵母菌快速准确的检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

白假丝酵母菌(Candida albicans)是一种真菌，又称白色念珠菌，通常存在于正常人的口腔，上呼吸道，肠道及阴道，一般在正常机体中数量少，不引起疾病，当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调，则本菌大量繁殖并改变生长形式(芽生菌丝相)侵入细胞引起疾病。白色念珠菌在很大一部分人群中作为共生菌存在，无症状地定植于口腔、胃肠道和生殖道。然而，在屏障完整性和/或宿主免疫应答受到干扰时，真菌可通过上皮迁移，并侵入机体细胞并引起疾病。

目前白假丝酵母菌常用的检测方法主要有生化培养鉴定、血清学检测等。白假丝酵母菌的传统检测方法全过程大约需要5-10d，且检出限极低，费时费力，不能及时、灵敏地检测食品中的致病菌，无法用于处理食物突发事件。与白假丝酵母菌其他检测法相比，PCR方法具有极好的敏感性，但必需经过选择性增菌以稀释可能干扰检测反应的某些成分，一个完整的以PCR为基础的白假丝酵母菌检测法需2d完成。建立一种快速、灵敏、特异的白假丝酵母菌检测方法迫在眉睫。

基于闭合颈环介导的核酸恒温扩增技术(Closed Dumbbell mediatedIsothermal Amplification of nucleic acids，CDA)是国科宁波生命与健康产业研究院开发的替代日本LAMP核酸扩增的方法(中国专利申请号：202110473121.8)。该方法主要利用2种不同的特异性引物识别靶基因的特定区域，在等温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如PCR等)相比，CDA反应在恒温水浴箱便可完成，仪器设备要求低，较传统PCR和培养法操作简单许多，不需要专业人士也可准确完成，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CDA还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于白假丝酵母菌的快速诊断。此外，CDA所用关键成环引物约为30bp，较LAMP中成环引物40bp短，这将极大节省成本。

发明内容

本发明的目的是，提供一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、试剂盒及其应用。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下：

一种非疾病诊断目的的检测白假丝酵母菌的CDA引物组，所述CDA引物组为以下三对引物，

引物对CA-F2/CA-R2，其中，CA-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，CA-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

引物对CA-LF/CA-LR，其中，CA-LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，CA-LR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

引物对CA-MF/CA-MR，其中，CA-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，CA-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明还提供一种检测白假丝酵母菌的试剂盒，所述试剂盒包括上述的CDA引物组。

作为优选实施方案，所述CDA引物组中，引物CA-F2与CA-R2的浓度均为0.2～0.4μM，引物CA-LF与CA-LR的浓度均为0.4～1.5μM，引物CA-MF与CA-MR的浓度均为1～2μM。