[发明专利]一种检测白假丝酵母菌的CDA引物组、试剂盒及其应用在审
申请号: | 202210120778.0 | 申请日: | 2022-02-09 |
公开(公告)号: | CN114427005A | 公开(公告)日: | 2022-05-03 |
发明(设计)人: | 毛瑞;蔡昊;蔡挺;桂峥 | 申请(专利权)人: | 国科宁波生命与健康产业研究院;中国科学院大学宁波华美医院 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/6844;C12R1/725 |
代理公司: | 上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙) 31251 | 代理人: | 王法男 |
地址: | 315016 *** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 白假丝 酵母菌 cda 引物 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种非疾病诊断目的的检测白假丝酵母菌的CDA引物组,其特征在于:所述CDA引物组为以下三对引物,
引物对CA-F2/CA-R2,其中,CA-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,CA-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;
引物对CA-LF/CA-LR,其中,CA-LF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,CA-LR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;
引物对CA-MF/CA-MR,其中,CA-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,CA-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括权利要求1所述的CDA引物组。
3.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述CDA引物组中,引物CA-F2与CA-R2的浓度均为0.2~0.4μM,引物CA-LF与CA-LR的浓度均为0.4~1.5μM,引物CA-MF与CA-MR的浓度均为1~2μM。
4.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括Bst聚合酶、CDA反应缓冲液、超纯水、以及显色剂。
5.如权利要求4所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述显色剂选自Sybrgreen I、Eva green、羟基萘酚蓝、铬黑T中的一种。
6.如权利要求4所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述CDA反应缓冲液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和TritonX-100。
7.如权利要求2所述的一种检测白假丝酵母菌的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒反应体系的组成为,
2-50mM Tris-HCl pH8.8
2-20mM KCl
2-20mM(NH4)2SO4
2~20mM MgSO4
0.1~0.5%TritonX-100
0.2~1M甜菜碱
1~1.6mM dNTP
5~10U Bst DNA聚合酶
100~150μmol/L显色剂
0.2~0.4μM引物CA-F2
0.2~0.4μM引物CA-R2
0.4~1.5μM引物CA-LF
0.4~1.5μM引物CA-LR
1~2μM引物CA-MF
1~2μM引物CA-MR;
反应溶剂为超纯水。
8.权利要求7所述的试剂盒的非疾病诊断目的的检测白假丝酵母菌的方法,包括以下步骤:
步骤1,将待检测核酸样本和试剂盒的反应体系混合,制得扩增反应液;
步骤2,上述制得的扩增反应液,于60~65℃反应20~80min,根据显色结果判断样品是否含有白假丝酵母菌。
9.权利要求1所述的CDA引物组在非疾病诊断目的的白假丝酵母菌检测中的应用。
10.权利要求2-7任一项所述的试剂盒在非疾病诊断目的的白假丝酵母菌检测中的应用。
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