[发明专利]一对Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物及其分子检测方法

说明书

本发明公开了一对Wxc型糯高粱的ARMS‑PCR引物及其分子检测方法，本发明属于糯高粱甄选检测技术领域。公开的引物Wxc‑F、Wxc‑R的核酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示，Wxc型糯高粱的ARMS‑PCR分子检测方法，包括如下步骤：(1)ARMS‑PCR引物对Wxc‑F、Wxc‑R的设计；(2)样品总DNA的提取，利用S1的引物进行ARMS‑PCR扩增反应；(3)采用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增产物，根据凝胶成像系统上成像判定检测结果，若有条带生成，则表明该样品中含Wxc型糯高粱；若无条带生成，则表明该样品中不含Wxc型糯高粱。本发明不需要限制性内切酶进行切割，且适用于大量样品分析。

技术领域

本发明属于糯高粱甄选检测技术领域，具体涉及一对Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物及其分子检测方法。

背景技术

高粱为世界重要粮食作物之一，与许多禾谷类作物一样，其种子的胚乳具有糯性和粳性之分，这是由胚乳中直链淀粉和支链淀粉含量及比例决定的。颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)是淀粉合成途径中的关键酶，它直接参与直链淀粉的生物合成。高粱糯性性状分为4种类型Wxa、Wxb、Wxc和Wxd。Wxc是由GBSS基因第九内含子上有1个G缺失，导致阅读框的转变和早期翻译终止。该缺失位于原核生物和真核生物高度保守的区域。

糯高粱是酿造白酒的主要原料，国酒茅台、五粮液、郎酒等名酒的酿酒工艺对高粱有着特殊要求。选育具有高乙醇转化率、高产量、高品质等优良籽粒性状的糯性高粱越来越受到白酒行业的重视。据有关文献报道，我国西南地区白酒酿造用糯高粱主要为Wxa型和Wxc型糯高粱。

过去糯高粱的鉴别方法主要为碘染色法、双波长比色法等，仪器简单、操作方便，但存在无法通量检测、效率低的问题，随着生物检测技术的发展，生物检测技术也应用在了糯高粱甄选上。目前，针对高粱糯性性状鉴别普遍采用普通PCR法和全基因组测序法。①普通PCR法：是一种在体外对特定的DNA片段进行扩增的技术，可以将少量的DNA片段进行放大扩增。PCR技术的操作简便，只需将反应液和引物加入PCR仪中，大部分过程都能由仪器自动完成，扩增过程也较为迅速，一般只需要3个小时左右即可完成扩增。不过，PCR反应产物需要用限制性内切酶对产物进行酶切，进行观察实验结果。其反应耗材较多，操作复杂。②全基因组测序法：全基因组测序包含糯高粱个体的核DNA的全部遗传信息，与参考粳高粱基因组比对可以获得非常全面的遗传标记信息，如SNP等分子标记。但其成本高、时间周期长，不适用于大量样品分析，因此很难在大多数检测部门推广使用。

ARMS-PCR分子检测是比较好的方法，专利申请号为2020111655981、专利名称为Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物及其分子检测方法的专利申请就公开了Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子检测方法，然而该申请虽然公开了Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子检测方法，但是其引物却并未公开，使得该方法无法得以实现，其它引物已无法应用于Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一对Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物及其分子检测方法，以解决现有酿酒高粱检测技术存在成本高、时间周期长，不适用于大量样品分析，因此很难在大多数检测部门推广使用的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

Wxc型糯高粱的ARMS-PCR引物，包括Wxc-F、Wxc-R，其核酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示，分别为：

SEQ ID NO：1 5’-caaat acgac gtgtc aacat-3’；

SEQ ID NO：2 5’-ttgtt gcact cagaa ccagc-3’。

Wxc型糯高粱的ARMS-PCR分子检测方法，包括如下步骤：

(1)ARMS-PCR引物对Wxc-F、Wxc-R的设计；