[发明专利]一种检测小麦转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测小麦转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用。所述的检测小麦常用的转基因元件及转基因品系的引物对组合包括以扩增9种常用小麦转基因元件、3种转基因品系Ta_B73‑6‑1、Ta_B72‑8‑1、Ta_B102‑1‑2特异性序列以及2种小麦内参基因Ta_Waxy‑D10和Ta_GAG56D的引物组。本发明还涉及检测小麦转基因元件和品系的试剂盒与检测方法。本发明技术方案操作简单，检测效率高，检验对象全面，具有较高的检测特异性、准确度和灵敏性等特点；可用于转基因小麦及其制品的大规模检测，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测小麦转基因成分和转基因品 系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

小麦(Triticun aestivum L.)属于禾本科小麦属。在世界范围内是种植 面积最大，总产量最高的粮食作物，是重要的植物蛋白来源之一的粮食作物。 恶劣的气候以及病虫害都会严重制约小麦的生产。为了创制新品种，导入外源 基因改良小麦性状。自1992年第一株转基因的小麦诞生以来，小麦的遗传改 良得到了巨大的发展。然而转基因技术对粮食安全问题意义重大。因此，开发 高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。

转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测 方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技 术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光 定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵 敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂， 容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵 敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通 的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过6重，否 则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转 基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平 行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高 昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制 了该技术在检测中的广泛应用。

因此研发一种高效、灵敏和通量高的转基因产品检测方法，成为亟待解决 的关键问题。

发明内容

本发提供了一种面检测小麦转基因元件和品系的引物对组合、试剂盒及检 测方法，以解决基于定量PCR技术通量低、基因芯片和数字PCR技术的转基因 检测成本高的技术问题。

本发提供的一种全面检测小麦转基因元件和品系的技术方案，以9种检测 常用的小麦转基因元件Ubi、pRice_actin、Hsp、tNOS、aad、GUS、bar、PAT、 cp4epsps和3个转基因品系Ta_B73-6-1、Ta_B72-8-1、Ta_B102-1-2的特异性 核苷酸序列即本发明所筛选的靶标分子，以及内参基因Ta_Waxy-D10和 Ta_GAG56D作为检测目标，设计多重PCR扩增引物对的核苷酸序列；开发了14 对引物，所述引物互相间不影响，可以通过多重PCR进行高效的扩增。所述多 重PCR引物组合可以用于开发小麦转基因元件和品系检测试剂盒。

具体的技术方案为，第一方面，本申请提供了一种检测小麦转基因元件和 品系引物对组合，即包括编号为TaGMO1、TaGMO2、TaGMO3、TaGMO4、TaGMO5、 TaGMO6、TaGMO7、TaGMO8、TaGMO9、TaGMO10、TaGMO11、TaGMO12的12对引 物，每对引物由正向引物和反向引物组成，具体的引物对组合核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.24所示。

还提供了包括用于扩增小麦内参基因Ta_Waxy-D10和Ta_GAG56D的编号为TaGMO13、TaGMO14两对引物对组合，每对引物由正向引物和反向引物组成，其 核苷酸序列如SEQ ID NO.25-SEQ ID NO.28所示。