[发明专利]一种检测小麦转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用

权利要求书

1.一种检测小麦转基因元件及转基因品系的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合包括编号为TaGMO1、TaGMO2、TaGMO3、TaGMO4、TaGMO5、TaGMO6、TaGMO7、TaGMO8、TaGMO9、TaGMO10、TaGMO11、TaGMO12的12对引物，每对引物由正向引物和反向引物组成，具体的引物对组合核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.24所示。

2.根据权利要求1所述的引物对组合，其特征在于，所述引物对组合还包括用于扩增小麦内参基因Ta_Waxy-D10的编号为TaGMO13和内参基因Ta_GAG56D的编号为TaGMO14两对引物对组合，每对引物由正向引物和反向引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.25-SEQ IDNO.28所示。

3.一种检测小麦转基因元件和转基因品系的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的检测小麦转基因元件和品系的引物对组合和权利要求2所述的用于扩增小麦内参基因Ta_Waxy-D10、Ta_GAG56D的引物对组合。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括多重PCR预混液。

5.权利要求1或2所述的引物对组合、权利要求3或4的述的检测试剂盒在检测转基因小麦及相关产品中的应用。

6.一种检测小麦转基因元件和品系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)以小麦转基因元件和品系的特征核苷酸序列及小麦内参基因为参考，得到多重PCR引物；

2)得到待测小麦样品的DNA；以所述DNA为模板，将所述多重PCR引物加入反应体系中，进行扩增反应，得到扩增产物；将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量文库；将所述高通量文库中的基因序列进行分析，以实现检测小麦常见转基因元件和品系。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的环境/程序包括：94℃预变性5分钟；第一步扩增反应，94℃变性15s，62℃～56℃退火30s，12个Touch Down cycle，(每个循环退火及延伸的温度降低0.5℃)；第二步扩增反应，94℃变性15s，57℃退火30S，22个cycle。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，反应体系包括：总体系40μl，引物预混液2.5μl、2×buffer：20μl，多重PCR扩增酶：0.5μl；其余的用水补充；剩余的用水补充；所述高通量文库的浓度大于2ng/ul为合格。