[发明专利]一种原位杂交探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备原位杂交探针的方法，其特征在于，所述方法包括：

以目标基因组为模板使用滚环扩增试剂进行滚环扩增，获得原位杂交探针前体，对所述原位杂交探针前体进行超声处理或PCR扩增，得到所述原位杂交探针；

所述滚环扩增试剂包括结合序列C-seq、DNA连接酶、DNA聚合酶和dNTPs；

所述结合序列C-seq从5’端至3’端依次包括5’靶结合区、通用引物结合区F、T7启动子区、通用引物结合区R和3’靶结合区，所述5’靶结合区和3’靶结合区能够与目标基因组互补结合。

2.根据权利要求1所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，所述通用引物结合区F的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；

优选地，所述T7启动子区的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列；

优选地，所述通用引物结合区R的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列；

优选地，所述5’靶结合区和3’靶结合区与目标基因组互补结合的区域位于目标基因组非重复区。

3.根据权利要求1所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，所述DNA连接酶包括T4 DNA连接酶；

优选地，所述DNA聚合酶包括phi29 DNA聚合酶。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)以目标因组DNA为模板使用滚环扩增试剂进行滚环扩增，获得原位杂交探针前体，所述滚环扩增试剂包括结合序列C-seq、DNA连接酶、DNA聚合酶和dNTPs，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP和修饰dUTP，所述修饰dUTP包括红色-dUTP、绿色-dUTP或DIG-dUTP；

(2)超声处理所述原位杂交探针前体，并电泳获得所述原位杂交探针。

5.根据权利4所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，步骤(1)所述dTTP和修饰dUTP的比例为(1～2):(2～3)。

6.根据权利要求1-3任一项所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1’)以目标因组DNA为模板使用滚环扩增试剂进行滚环扩增，获得原位杂交探针前体，所述滚环扩增试剂包括结合序列C-seq、DNA连接酶、DNA聚合酶和dNTPs，所述dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP；

(2’)使用通用引物，以所述原位杂交探针前体为模板进行PCR扩增，获得双链DNA；

(3’)使用缺口平移法对所述双链DNA进行标记，得到所述杂交探针。

7.根据权利要求6所述的制备原位杂交探针的方法，其特征在于，步骤(1’)所述dATP、dCTP、dGTP和dTTP的比例为1:1:1:1。

8.权利要求1-7任一项所述的制备原位杂交探针的方法制备得到的原位杂交探针。

9.权利要求8所述的原位杂交探针在制备用于原位杂交检测产品中的应用。

10.一种原位杂交检测试剂盒，其特征在于，所述原位杂交检测试剂盒包括权利要求8所述的原位杂交探针。