[发明专利]ESR1基因突变多重检测引物探针及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种ESR1基因突变多重检测引物探针及其试剂盒包括上游引物、下游引物、野生型探针、检测ESR1基因10号外显子Y537C突变的突变型探针MP‑Y537C、检测ESR1基因10号外显子Y537N突变的突变型探针MP‑Y537N、检测ESR1基因10号外显子Y537S突变的突变型探针MP‑Y537S、检测ESR1基因10号外显子D538G突变的突变型探针MP‑D538G。本发明的ESR1基因突变多重检测引物探针及其试剂盒快速高效，标准品的配制简单，检测体系的特异性与灵敏度高，游离DNA的利用率高，准确度高。

技术领域

本发明涉及一种ESR1基因突变检测产品，属于生物技术领域。

背景技术

ESR1(Estrogen Receptor1)基因编码的人类雌激素受体α蛋白(Estrogenreceptor alpha,ESRα)，其与雌激素结合后，激活细胞内一系列周期反应，促使细胞生长增值。ESR1基因的激活突变如乳腺癌的发生发展息息相关。其中，ESR1基因最为常见的突变类型为有Y537S，Y537C，Y537N以及D538G。这些突变使得ESRα的构象改变，使其可在不与雌激素结合的情况，表现为持续性激活状态。

乳腺癌是最常见的妇科妇科肿瘤之一。超过70％的原发性乳腺癌雌激素受体(ER)呈阳性，许多乳腺癌最初对内分泌治疗有反应。尽管治疗乳腺癌的新疗法的开发正在不断改善，但对这些药物的先天和获得性耐药性仍然是一个挑战。肿瘤微环境被认为是赋予癌症治疗先天耐药性的主要因素，而很大一部分患者在接受他莫昔芬等全身抗雌激素或雌激素剥夺治疗如芳香化酶抑制剂(AIs)时会产生耐药性。许多机制，包括激活细胞存活、细胞应激和细胞信号通路，已经被认为是获得性耐药性的驱动因素。最近研究指出了雌激素受体(ESR1)基因的激活突变在驱动耐药性中起重要作用。已确定的关键的激活突变热点有p.L536，p.Y537和p.D538，这些突变产生不依赖于雌激素配体的内质网转录活性，被认为是耐药突变。

由于肿瘤自身的异质性，存在继发性耐药。癌症生物标志物在疾病类型和疾病进展阶段而不同，这使早期阶段的癌症检测和识别复杂化。癌症生物标志物在疾病类型和疾病进展阶段而不同，这使早期阶段的癌症检测和识别复杂化。循环肿瘤DNA(ctDNA)作为一种“液体活检”手段越来越突出，用于检测和监测系统治疗的耐药性。对激素治疗的获得性耐药性可能是基于雌激素受体基因(ESR1)的激活突变。使用cfDNA进行肿瘤突变检测的优点包括i)无创收集，ii)病程中任何时间的可用性，iii)实时检测和动态监测与肿瘤组织检测相比，异质性问题可能更少。体外和临床前数据表明，ESR1突变导致AI完全耐药，并对ER激动剂和拮抗剂产生部分耐药。ESR1激活突变的检测可能与指导临床医生进行内分泌和非内分泌治疗。cfDNA片段相对较小，峰值大小约为180bp。肿瘤来源的DNA部分在总cfDNA中的百分比是单独可变的，往往太低，无法检测。因此，开发一种具有高灵敏度的基于cfDNA的EGFR突变检测方法具有重要意义。

聚合酶链反应(PCR)的发明改变了生命科学的研究和分子诊断。现在，数字PCR(dPCR)正在改变传统PCR的领域，并重新定义了对突变检测的检测下线。对于许多检测方法，dPCR的敏感度明显高于传统的PCR分析，并且通过单独计数更多的分子，提高了检测方法的准确性和精度。数字PCR的敏感性将会提高检测限制重新定义了我们对疾病发病、进展和复发的理解。数字PCR的一个特别有吸引力的应用是在大量野生型分子中定量检测少量的突变DNA分子，这与癌症研究有关，特别是与次要等位基因的检测有关。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速高效，检测体系的特异性与灵敏度高，游离DNA的利用率高，准确度高的ESR1基因突变多重检测引物探针，以及采用该引物探针的试剂盒。