[发明专利]检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用，所述引物探针组合包括1对引物、探针PA和探针PG；所述试剂盒中包含上述引物探针组合，用于检测在检测GLP1R基因rs6923761多态性位点。本发明的试剂盒对西格列汀、维格列汀用药相关的基因突变进行检测时，检测特异性强、灵敏度高、安全性高，且操作简单、耗时短、结果易读，具有很好的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及一种引物探针组合及其应用，尤其涉及一种检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用。

背景技术

糖尿病是目前威胁人们健康的重要慢性代谢性病之一，其发病率呈逐年上升趋势。2017年中国糖尿病患病率为11.2％，患者数量约1.56亿，位居世界第一，糖尿病分型以2型糖尿病为主。肠促胰岛素样肽1由肠道L细胞分泌，与胰岛B细胞表面GLP-1受体(Glucagon-likepeptide1receptor，GLP1R)结合后，通过G蛋白偶联途径调控胰岛素的分泌。近几年有研究发现，2型糖尿病患者虽然餐后GLP-1水平未见改变，但胰岛素分泌功能却明显受损；此外，一些2型糖尿病患者对外源性GLP-1刺激不敏感，提示可能与GLP1R基因的功能异常有关。GLP1R基因多态性位点可显著影响健康人输注GLP-1后胰岛B细胞的应答，GLP1R rs6923761基因多态性位点与GLP-1刺激的胰岛素分泌减少相关，故在2型糖尿病患者中检测GLP1R基因多态性位点可能有助于阐明个体差异的原因和指导疾病治疗。

维格列汀片属于口服降糖药，属于二肽基肽酶4抑制剂，也称为DPP-4抑制剂，此药物能增强胰岛素的敏感性，主要通过对二肽基肽酶4的抑制作用，从而增强葡萄糖依赖性的胰岛素分泌。维格列汀对于空腹血糖，以及餐后血糖、高血糖的患者，都具有一定的降糖功效。GLP1R rs6923761基因多态性位点与西他列汀或维达格列汀的疗效相关。和GG基因型患者相比，AA基因型和2型糖尿病患者对西他列汀或维达格列汀的反应可能降低。和AA基因型患者相比，GG基因型和2型糖尿病患者对西他列汀或维达格列汀的反应可能增加。因此在临床用药前，对于进行GLP1R基因多态性检测，对携带基因型为AA或AG的患者换药或加大西他列汀或维达格列汀的剂量具有很大的指导意义，同时还有助于监测血糖水平。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合、试剂盒及其应用。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合，检测GLP1R基因rs6923761多态性位点SNP分型的引物探针组合的正向引物如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ ID NO：2所示，探针PA如SEQ ID NO：3所示，探针PG如SEQ ID NO：4所示。

一种包含上述检测GLP1R基因多态性位点SNP分型的引物探针组合的试剂盒。

进一步的，所述试剂盒中含有引物探针组合液；

引物探针组合液中正向引物、反向引物、探针PA、探针PG的浓度比为1：1：1：0.5。

进一步的，所述试剂盒中的试剂还包括反应液。

进一步的，反应液是由0.2体积份Taq DNA聚合酶、10体积份buffer Mix for SNP3#、3体积份Mega buffer Mix for SNP和3.8体积份ddH₂O配制而得。

一种上述试剂盒在检测GLP1R基因rs6923761多态性位点中的应用。

进一步的，所述应用的具体步骤是取待测样本核酸分别与试剂盒中的试剂，振荡混匀，离心，制成待测反应体系，再进行PCR扩增反应，每个反应获得2个扩增曲线图和CT值，再根据所得扩增曲线图和CT值判断待测样本核酸的基因型。