[发明专利]一种赤霉素半抗原与抗原的制备及其应用

说明书

本发明公开了一种赤霉素半抗原与抗原的制备及其应用，所述赤霉素半抗原是以赤霉素为原料与3,6,9,12‑四氧杂十四烷‑1,14‑二胺反应得到，其分子结构式为：本发明合成赤霉素半抗原与抗原的合成步骤简便，采用该抗原制备的抗体具有较高的特异性和灵敏度，可用于建立免疫学检测方法，从而用于快速检测食品中的赤霉素。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种赤霉素半抗原与抗原的制备及其应用。

背景技术

赤霉素(gibberellins，GAs)是一类非常重要的植物激素，参与许多植物生长发育等多个生物学过程。赤霉素最突出的作用是加速细胞的伸长(赤霉素可以提高植物体内生长素的含量，而生长素直接调节细胞的伸长)，对细胞的分裂也有促进作用，它可以促进细胞的扩大(但不引起细胞壁的酸化)，除此之外，赤霉素还有着抑制成熟，侧芽休眠，衰老，块茎形成的生理作用。

随着农药产业的发展，化学农药在作物病虫害的综合防治中具有不可替代的作用，引起人们的普遍关注。但是，由于长期和大量地使用化学农药，致使一些性质较为稳定，对人畜具有积累性、慢性毒害的化学成分，在动植物体内，甚至在人体内不断积累。不仅影响我国人民的生活质量，又影响到我国食品的出口创汇，从而多方面制约着农业生产效益和经济效益的提高。

赤霉素是一种低毒的植物激素类农药，尽管毒性不大，但是长期、大量、不合理的使用也会对人类的身体健康产生不利影响，因此，农产品如水果、蔬菜中赤霉素残留量检测方法的研究具有极重大的经济意义和社会意义。

现有的赤霉素检测方法主要是仪器检测法，如高效液相色谱法、荧光比色法，虽然仪器检测具有较高的准确度，但是仪器价格相对昂贵，并且需要专业的操作人员进行操作，不适于普遍应用。免疫检测法作为一种快速的检测方法，在检测领域发挥着重大的作用，然而目前还没有采用免疫法进行赤霉素的检测研究。

发明内容

为了解决以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种赤霉素半抗原与抗原的制备及其应用。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种赤霉素半抗原的制备方法，所述赤霉素半抗原是以赤霉素为原料与3,6,9,12-四氧杂十四烷-1,14-二胺反应得到，其分子结构式为：

进一步的，赤霉素半抗原的制备步骤如下所示：

(1)称取赤霉素原料，用pH6.2的磷酸缓冲液进行溶解，在搅拌的条件下缓慢加入NHS，于室温下反应20-30min，然后再加入EDC继续搅拌1-2h，最后加入3,6,9,12-四氧杂十四烷-1,14-二胺继续搅拌反应过夜，制得反应液；

(2)将反应液使用pH6.2的磷酸缓冲液进行透析，透析袋的截留分子量为100-500，透析2-3天后进行冷冻干燥，即制得赤霉素半抗原。

进一步的，所述赤霉素原料为C19赤霉素。

进一步的，所述赤霉素与NHS和EDC的摩尔比为1:3:5。

进一步的，所述赤霉素与3,6,9,12-四氧杂十四烷-1,14-二胺的摩尔比为1:3-5。

一种赤霉素抗原的制备方法，该抗原使用本发明所述的半抗原与载体蛋白偶联制得。

进一步的，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白的一种。

进一步的，赤霉素抗原的制备步骤如下：

(1)将半抗原溶于pH7.4的磷酸盐缓冲液中，在搅拌的条件下缓慢滴加戊二醛溶液，使得戊二醛最终质量浓度为1-1.5％，制得A液；