[发明专利]一种含有神经毒素的液体制剂及其制备方法

说明书

本发明提供了一种含有神经毒素的液体制剂及其制备方法，还包括稳定剂和水，所述稳定剂包括氯化钠和氨基酸，液体制剂中氯化钠和氨基酸相互配合，产生协同增效作用，使得神经毒素的稳定性显著提升，极大缓解了神经毒素的降解，保持神经毒素为95％以上生物活性的时间明显延长。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种含有神经毒素的液体制剂及其制备方法。

背景技术

中华眼镜蛇(Naja atra)，又名舟山眼镜蛇，在广东、广西、中国香港俗称饭铲头，中国台湾则称之为饭匙倩、饭匙铳、膨颈蛇。中华眼镜蛇属于眼镜蛇科，是我国十大毒蛇之一，分布于中国南部、中国台湾和中南半岛的中低海拔地区，常栖息于平原、丘陵和低山，多见于耕作区、路边、池塘附近、住宅院内，习惯在白昼活动。中华眼镜蛇体色一般为黑褐或暗褐，背面有或无白色细横纹，成蛇体全长为1.5-2米。中华眼镜蛇属沟牙类毒蛇，受惊扰时常竖立前半身，颈部平扁扩大，作攻击姿态，同时颈背露出呈双圈的“眼镜”状斑纹，咬伤后会迅速分泌蛇毒，刚开始局部症状不明显，流血少、红肿热病轻微。但是伤后数小时内出现急剧的全身症状，出现兴奋不安，痛苦呻吟，全身肌肉颤抖，吐白沫，吞咽困难，呼吸困难，最后卧地不起，全身抽搐，呼吸肌麻痹而死亡。眼镜蛇毒为眼镜蛇科动物眼镜蛇毒腺分泌的毒液，用于致猎物于死地的剧毒物质，眼镜蛇神经毒素的干物质中90％以上是蛋白质，是其毒性和生物学活性的主要成分，此外，蛇毒中约含二十多种酶类和毒素，并且还含有一些小分子肽、氨基酸、碳水化合物、脂类、核苷、生物胺类及金属离子等。目前可从蛇毒中分离出神经毒素、心脏毒、磷脂酶、眼镜蛇毒因子、神经生长因子、细胞色素、直接溶解因子等活性成分，在临床上可用于抗肿瘤、抗炎、抗血栓、镇痛及移植排斥反应和其他自身免疫性疾病等的治疗。

蛇毒成分十分复杂，不同蛇毒的毒性、药理及毒理作用各具特点。其中蛇毒神经毒素是蛇毒中一类重要的活性组分，主要分布在眼镜蛇科、海蛇科及蝰科的响尾蛇蛇毒中，是该类蛇伤人致死的主要成分。随着人们对蛇毒神经毒素深入研究发现，神经毒素可分为3类：突触前神经毒素(β- 神经毒素)、突触后神经毒素(α-神经毒素)和类神经毒素，前两者主要抑制运动终板处的神经肌肉传导，造成肌肉麻痹和呼吸衰竭，而后者可以阻断平滑肌收缩和离子通道，表现出类神经毒活性。通过不断对眼镜蛇α-神经毒素的研究过程中也逐渐发现其有镇痛、戒毒作用，也有降低免疫排斥抗肿瘤的作用。1936年Macht提出肌肉注射微量眼镜蛇毒具有类似吗啡的中枢镇痛作用。美国Hynson，WestcottDunning公司对眼镜蛇粗毒进行初步分离，制成Cobroxin和Nyloxin两种神经毒素制剂，用于治疗顽固性疼痛、恶性肿瘤疼痛和关节痛。这两种药物已列入美国药物局方。自1952年起，我国开展对蛇毒的镇痛作用研究，开发了蛇毒粗毒制剂和蛇毒神经毒素制剂，用于临床治疗疼痛，其中以中科院昆明动物研究所研制的眼镜蛇毒α-神经毒素制剂“克痛宁(后改名为科博肽注射液)”为代表，用于治疗坐骨神经痛、三叉神经痛、神经血管性头痛以及风湿痛、癌症疼痛等顽固性疼痛，疗效显著且副作用少。目前镇痛机制还未明确，有多数学者认为神经毒素通过作用于胆碱能系统、内源性阿片系统来缓解恶性肿瘤疼痛、神经性疼痛、顽固性疼痛和关节痛，但也有部分人认为通过补体旁路途径来达到镇痛作用。眼镜蛇神经毒素剂量依赖性显著提高小鼠疼痛性刺激阈值，镇痛作用持久且无依赖性、戒断成瘾性等副作用，有望成为媲美美沙酮替代吗啡且无戒断效应的镇痛药物，亦可投入戒毒治疗；神经毒素可在临床上诊断重症肌无力等神经性疾病，治疗神经性疼痛、神经硬化症及急性中毒昏迷等；现在越来越多的人支持器官移植技术，而器官移植面临的一个重大挑战就是免疫排斥反应。当移植器官发生免疫排斥反应时，通常伴随炎症反应的发生，而眼镜蛇毒神经毒素能有效的降低炎症反应，发挥免疫抑制作用。眼镜蛇毒神经毒素抗免疫排斥可能与其作用于毒蕈碱受体(M 受体)有关，将T细胞抑制在G0/G1期，进而降低细胞免疫的发生。而且还有发现长期给予神经毒素也未发现相关的不良反应，极大可能成为新一代免疫抑制剂；眼镜蛇毒也有抗肿瘤作用，其中的α-神经毒素可抑制肿瘤细胞增殖，也可诱导肿瘤肿瘤细胞凋亡。其作用机制复杂，至今尚未明确，但有研究表明，神经毒素可通过影响线粒体功能、阻滞细胞周期，导致细胞凋亡；亦可通过抑制烟碱乙酰胆碱受体，抑制细胞外信号调节激酶磷酸化，触发线粒体凋亡，从而抑制肿瘤生长；还可通过调节Ca²⁺，破坏膜结构，导致细胞溶解、死亡。