[发明专利]林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及亲权鉴定应用

说明书

本发明涉及林麝微卫星标记技术，具体涉及一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及亲权鉴定应用，其目的是解决现有采用微卫星标记位点技术进行林麝基因鉴定中存在鉴定结果不够准确的技术问题，提供一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及亲权鉴定应用，通过采用四碱基重复的合适的位点组合，实现了基于基因鉴定的林麝准确亲权鉴定。本发明采用筛选出的最能反映林麝基因特点的11个微卫星位点，并给出了相应的引物组合、试剂盒，利用引物组合、试剂盒，实现了林麝的高精度亲权鉴定，精确度达到99.99％，具有快速、准确、简便和实现成本较低的优点。

技术领域

本发明涉及林麝微卫星标记技术，具体涉及一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及亲权鉴定应用。

背景技术

林麝(Moschus berezovskii)隶属偶蹄目(Artiodactyla)、反刍亚目(Ruminantia)、麝属(Moschus)、麝种(Moschus berezovskii)，是麝属中体型最小的动物，因成年雄性林麝分泌珍贵麝香而闻名。由于麝香具有巨大的经济价值，导致林麝被大规模偷盗捕杀，林麝种群数量锐减，2002年，林麝被列为国家一级重点保护动物，在2008年的世界自然保护联盟(IUCN)濒危物种红色名录中，林麝被评为濒危物种。自1958年开始驯养林麝，经过60余年的发展，林麝驯养已成为具有一定规模的产业，实现了圈养及繁殖，并于驯养初期实现了可持续的人工活体取香，从而使林麝驯养成为麝香可持续供应的合法基础，也是林麝物种保护的重要途径。

人工养殖林麝虽为林麝资源的有效保护手段之一，依然存在很多问题。比如，谱系不清，近交繁殖导致的种群遗传多样性降低、种群退化、体质下降、疾病频发等问题日益凸显。因此，准确的谱系管理是科学繁育工作的基础。例如，对种群退化问题的解决，首选要考虑避免近交衰退，这就需要准确判定个体间的遗传关系远近。对于有准确谱系记录的麝场，可以做到本场内有效的繁育调配控制，但是对于麝场间林麝个体的繁育调配，就需要更高一级、更准确的谱系管理。如果这个高级谱系数据管理缺失或者数据不准确，就需要进行遗传鉴定，来判断林麝个体之间的遗传关系，避免近亲交配发生。

微卫星DNA也称为短串联序列重复(short tandem repeat，STR)或者简单序列重复(simple sequence repeat，SSR)，是一类简单的以核苷酸为基本单位的串联重复序列，微卫星DNA由核心序列和两侧的保守序列组成，其中侧翼序列将微卫星DNA特异的定位于染色体的某一区域，而核心序列的重复数则形成了微卫星DNA的多态性。通常核心序列重复单元长2-6碱基，如(CA)n、(GAG)n、(GACA)n，n为重复次数，为10-60次，由于重复次数不同使其呈现丰富的长度多态性。微卫星DNA多位于编码区附近，也可位于基因内的间隔区、外显子、内含子和调控区域，且分布均匀。微卫星在基因组中数目巨大，据估计，真核基因组中平均每6kb就存在一个微卫星序列。微卫星位点的多态性越高，标记位点数量越多，亲权鉴定的准确性就越高。微卫星标记符合孟德尔遗传特征，世代传承，变异频率较慢，但是每个个体又有差异，因此是一种可靠的遗传标记，现生产实践发现林麝的空香、白香、膏状香频频出现，谱系混乱、近交严重等现象。鉴于迄今仍未有针对林麝特定种群的亲权鉴定的试剂盒。为了实现科学有效地管理，为麝场选种育种提供指导，为种质资源的调配和遗传谱系管理提供准确可靠技术支持，为防止麝场圈养林麝群体近亲交配提供理论依据，必须尽快开发一种方法和监测试剂盒，来对林麝种群进行个体遗传标记。

综上，目前亟需一种能够对林麝进行准确亲权鉴定的微卫星位点组合、引物组合、试剂盒，以便于林麝的遗传管理等方面的应用。

发明内容

本发明的目的是解决现有采用微卫星位点标记技术进行林麝亲权鉴定中存在鉴定结果不够准确的技术问题，提供一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及亲权鉴定应用，通过采用四碱基重复的合适的位点组合，实现了基于基因鉴定的林麝准确亲权鉴定。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术解决方案如下：

一种林麝微卫星位点组合，其特殊之处在于：