[发明专利]鉴定红景天属药材的条形码基因及其方法和应用

说明书

本发明公开了鉴定红景天属药材的条形码基因及其方法和应用，具体是使用核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖‑1，5‑二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL形成DNA组合条形码基因，该条形码基因可以实现红景天属药材的准确鉴别，解决了依靠传统性状鉴别方法无法精准鉴别红景天属药材的难题，为药材经营贸易人员提供一种高效可靠的鉴别方法，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及药材种质资源的分子生物学检测领域，具体涉及一种鉴定红景天属药材的条形码基因，还涉及红景天属药材的鉴定方法和应用。

背景技术

中国景天科红景天属(Rhodiola)植物有73种2亚种7变种，且集中分布在喜马拉雅山脉、滇西北和川西高原地区。罕见的物种多样性与众多趋同的形态特征使红景天属内很多药材的真伪、优劣鉴定非常困难，随着中藏药现代化与世界化进程的推进，亟待快速、客观的鉴定方法。因此，急需一种能够快速、方便鉴定红景天的方法。

DNA分子标记技术具有遗传稳定、不受环境影响和检测迅速准确的优点，可以快速准确地鉴定一些外形很难区分的植物种群，因此在物种鉴定方面使用较为广泛。但是，目前未见关于红景天鉴定的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种鉴定红景天属药材的条形码基因；本发明的目的之二在于提供鉴定所述条形码基因的引物对；本发明的目的之三在于提供鉴定红景天属药材的方法；本发明的目的在于提供利用所述鉴定红景天属药材的条形码基因鉴定红景天属药材品种中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、鉴定红景天属药材的条形码基因，所述条形码基因为核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL中的一种或多种。

优选的，所述条形码基因序列为SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.63所示。

优选的，所述红景天属药材为大花红景天Rhodiola crenulata、长鞭红景天Rhodiola fastigiata、西藏红景天Rhodiola tibetica或柴胡红景天Rhodiolabupleuroides。

优选的，所述条形码基因序列为SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.33所示。

2、鉴定权利要求1所述条形码基因的引物对，所述引物对包括核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL；

所述核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2的扩增引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述成熟酶K编码基因matK的扩增引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的扩增引物如SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示。

3、鉴定红景天属药材的方法，包括如下步骤：

1)提取待测红景天属药材基因组DNA；

2)利用扩增核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的引物对进行PCR扩增，然后将经扩增产物进行测序，测序结果与红景天药材的条形码基因进行比对，并构建系统发育进化树，若测序结果与红景天属植物核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的序列一致或相似度为99％及以上并且在系统进化树中能够与红景天属植物之一聚为一支，则该样品为红景天属植物中的一种；