[发明专利]鉴定红景天属药材的条形码基因及其方法和应用

权利要求书

1.鉴定红景天属药材的条形码基因，其特征在于：所述条形码基因为核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述鉴定红景天属药材的条形码基因，其特征在于：所述条形码基因序列为SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.63所示。

3.根据权利要求1所述鉴定红景天属药材的条形码基因，其特征在于：所述红景天属药材为大花红景天Rhodiola crenulata、长鞭红景天Rhodiola fastigiata、西藏红景天Rhodiola tibetica或柴胡红景天Rhodiola bupleuroides。

4.根据权利要求1所述鉴定红景天属药材的条形码基因，其特征在于：所述条形码基因序列为SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.33所示。

5.鉴定权利要求1或2所述鉴定红景天属药材的引物对，其特征在于：所述引物对包括核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL；

所述核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2的扩增引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述成熟酶K编码基因matK的扩增引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的扩增引物如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

6.鉴定红景天属药材的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取待测红景天属药材基因组DNA；

2)利用扩增核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的引物对进行PCR扩增，然后将经扩增产物进行测序，测序结果与红景天药材的条形码基因进行比对，并构建系统发育进化树，若测序结果与红景天属植物核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2、成熟酶K编码基因matK和核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的序列一致或相似度为99％及以上并且在系统进化树中能够与红景天属植物之一聚为一支，则该样品为红景天属植物中的一种；

所述核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2的扩增引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述成熟酶K编码基因matK的扩增引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的扩增引物如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

7.根据权利要求4所述鉴定红景天属药材的方法，其特征在于：扩增核糖体DNA第二内转录间隔区ITS2的PCR程序包括95℃预变性4min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，32个循环；72℃延伸5min；

扩增成熟酶K编码基因matK的PCR程序包括95℃预变性4min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸60s，33个循环；72℃延伸5min；

扩增核酮糖-1，5-二磷酸化/加氧酶大亚基编码基因rbcL的PCR程序包括95℃预变性4min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，33个循环；72℃延伸5min。

8.根据权利要求4所述鉴定红景天属药材的方法，其特征在于：所述构建系统发育进化树采用的方法为邻接法。

9.利用权利要求1所述鉴定红景天属药材的条形码基因鉴定红景天属药材品种中的应用。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述红景天属药材为大花红景天Rhodiola crenulata、长鞭红景天Rhodiola fastigiata、西藏红景天Rhodiola tibetica或柴胡红景天Rhodiola bupleuroides。