[发明专利]一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法

权利要求书

1.一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒，其特征在于：包括用于特异性扩增的3种血清型的禽致病性大肠杆菌基因序列的引物对组合，其中，所述的3种血清型的APEC菌株分别为EC164、EC165、EC168。

2.根据权利要求1所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述用于特异性扩增O2型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；

用于特异性扩增O78型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；

用于特异性扩增O145型荚膜基因的引物对分别具有SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述PCR试剂盒包括2×RapidTaqMasterMix（withddH2O）。

4.根据权利要求3所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述PCR试剂盒包括3种血清型的阳性对照样本。

5.根据权利要求4所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒及鉴定方法，其特征在于：所述3种禽致病性大肠杆菌为EC164灭活菌液（O78阳性对照）、EC165（O2阳性对照）、EC168（O145阳性对照）。

6.根据权利要求4所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒的鉴定方法，其特征在于：该鉴定方法包括以下步骤：

S1：获取待检测菌株的纯培养物，得到菌液；

S2：利用权力要求2、3中所述的PCR试剂盒，对步骤S1中的菌液纯培养物进行多重PCR；

S3：对步骤S2的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据条带大小确定待检测APEC的血清型。

7.根据权利要求6所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒的鉴定方法，其特征在于：所述步骤S2中PCR反应体系为：2μL核酸反应模板，12.5μL2×RapidTaqMasterMix，1μL上游引物，1μL下游引物，加入ddH2O补齐至25μL。

8.根据权利要求7所述的一种禽致病性大肠杆菌三重PCR鉴定试剂盒的鉴定方法，其特征在于：所述步骤S2中PCR反应程序为：95℃5min；95℃15s、55℃15s、72℃30s，30个循环；72℃7min。