[发明专利]一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒及使用方法

说明书

本发明的一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒及使用方法，包括六项呼吸道病毒反应液、阳性对照液和阴性对照液，六项呼吸道病毒反应液为预分装至八连管中的冻干粉。其中，六项呼吸道病毒反应液A/B两管中含有多条不同荧光标记的探针、引物、酶混合物、增强剂、冻干保护剂、10xbuffer、核苷酸混合物等，可以在同一反应体系中检测是否存在呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、人偏肺病毒、副流感病毒Ⅰ型、副流感病毒Ⅱ型、副流感病毒Ⅲ型，A/B管均设置有内参对照，为人的保守基因β‑actin片段，标记ROX；内参对照能够显示假阴性的发生，避免了因样品中存在的抑制物或操作失误所导致假阴性判读结果的出现，从而提高PCR检测的准确率。

技术领域

本发明涉及六项呼吸道病毒核酸检测技术领域，尤指一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒及使用方法。

背景技术

目前呼吸道感染是临床常见病症，可由多种病毒引起。常见的呼吸道病毒包括：呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、人偏肺病毒、副流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒等。呼吸道病毒感染可以引起多种疾病，如感冒、流感、咽炎、喉炎、支气管炎、肺炎等，人体感染后主要临床症状，包括发热、流涕、咽痛、咳嗽、头痛和腹泻等。由于这些病毒引起的感染症状和流行感冒特点相似，仅靠临床症状对病原难以进行区分，实验室诊断方法有病毒分离、抗原检测与核酸检测等。但是现有的呼吸道病毒核酸检测难以同时检测多种病毒且难以对检测过程进行有效把控。

发明内容

本发明提供一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒及使用方法，解决现有呼吸道病毒核酸检测难以同时检测多种病毒且难以对检测过程进行有效把控的问题。

本发明提供的技术方案如下：一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒，包括反应液A、反应液B、阳性对照液和阴性对照液。

优选地，所述反应液A包括酶混合液、核苷酸混合液、10xBuffer、增强剂、冻干保护剂、DEPC水、副流感病毒Ⅰ型上游引物、副流感病毒Ⅰ型下游引物、副流感病毒Ⅰ型探针、呼吸道腺病毒上游引物、呼吸道腺病毒下游引物、呼吸道腺病毒探针、人偏肺病毒上游引物、人偏肺病毒下游引物、人偏肺病毒探针、内参上游引物、内参下游引物和内参探针。

所述反应液B包括U酶混合液、核苷酸混合液、10xBuffer、增强剂、冻干保护剂、DEPC水、呼吸道合胞病毒上游引物、呼吸道合胞病毒下游引物、呼吸道合胞病毒探针、副流感病毒Ⅱ型上游引物、副流感病毒Ⅱ型下游引物、副流感病毒Ⅱ型探针、副流感病毒Ⅲ型上游引物、副流感病毒Ⅲ型下游引物、副流感病毒Ⅲ型探针、内参上游引物、内参下游引物和内参探针。

优选地，所述阳性对照液包括呼吸道合胞病毒病毒样颗粒、呼吸道腺病毒病毒样颗粒、人偏肺病毒病毒样颗粒、副流感病毒Ⅰ型病毒样颗粒、副流感病毒Ⅱ型病毒样颗粒、副流感病毒Ⅲ型病毒样颗粒、内参β-actin病毒样颗粒和TE Buffer；所述阴性对照液为0.9％的氯化钠溶液。

优选地，所述副流感病毒Ⅰ型上游引物的序列为：

ACCTACAAGGCAACAACATC；

所述副流感病毒Ⅰ型下游引物的序列为CTTCCTGCTGGTGTGTTAAT；

所述呼吸道腺病毒上游引物的序列为：

GCCACGGTGGGGTTTCTAAACTT；

和/或；

所述呼吸道腺病毒上游引物的序列为：

GCCACGGTGGGGTTTCTAAACTT；