[发明专利]一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种六项呼吸道病毒核酸检测试剂盒，其特征在于：包括反应液A、反应液B、阳性对照液和阴性对照液；

其中，所述反应液A包括酶混合液、核苷酸混合液、10xBuffer、增强剂、冻干保护剂、DEPC水、副流感病毒Ⅰ型上游引物、副流感病毒Ⅰ型下游引物、副流感病毒Ⅰ型探针、呼吸道腺病毒上游引物、呼吸道腺病毒下游引物、呼吸道腺病毒探针、人偏肺病毒上游引物、人偏肺病毒下游引物、人偏肺病毒探针、内参上游引物、内参下游引物和内参探针；

所述反应液B包括酶混合液、核苷酸混合液、10xBuffer、增强剂、冻干保护剂、DEPC水、呼吸道合胞病毒上游引物、呼吸道合胞病毒下游引物、呼吸道合胞病毒探针、副流感病毒Ⅱ型上游引物、副流感病毒Ⅱ型下游引物、副流感病毒Ⅱ型探针、副流感病毒Ⅲ型上游引物、副流感病毒Ⅲ型下游引物、副流感病毒Ⅲ型探针、内参上游引物、内参下游引物和内参探针；

所述反应液A中的引物探针如下：

所述副流感病毒Ⅰ型上游引物的序列为ACCTACAAGGCAACAACATC；

所述副流感病毒Ⅰ型下游引物的序列为CTTCCTGCTGGTGTGTTAAT；

所述副流感病毒Ⅰ型探针的序列为：

CAAACGATGGCTGAAAAAGGGA；

和；

所述呼吸道腺病毒上游引物的序列为：

GCCACGGTGGGGTTTCTAAACTT；

所述呼吸道腺病毒下游引物的序列为：

GCCCCAGTGGTCTTACATGCACATC

所述呼吸道腺病毒探针的序列为：

TGCACCAGACCCGGGCTCAGGTACTCCGA；

和；

所述人偏肺病毒上游引物的序列为ATGTCTCTTCAAGGGATTCACC；

所述人偏肺病毒下游引物的序列为GTGTTATTTCTTGTTGCAATGATG；

所述人偏肺病毒探针的序列为：

CAAACATGCTATATTGAAAGAGTCTCAGTACAC；

所述反应液B中的引物探针如下：

所述呼吸道合胞病毒上游引物的序列为：

TTGGCAAATATGGAAACATACGT；

所述呼吸道合胞病毒下游引物的序列为：

GCCTTTTTCTAGGACATTGTACTGAAC；

所述呼吸道合胞病毒探针的序列为GCTTCACGAAGGCTCCACATAGG；

和；

所述副流感病毒Ⅱ型上游引物的序列为：

GAGAGTCATATCTCTTCCAAATACAAC；

所述副流感病毒Ⅱ型下游引物的序列为CTAGGTGATAGATCCCGCTTC；

所述副流感病毒Ⅱ型探针的序列为：

CAATGGGCCACAATCAATCCTGCAGTT；

和；

所述副流感病毒Ⅲ型上游引物的序列为：

GTGATCAGGAAACTATGTTGCAG；

所述副流感病毒Ⅲ型下游引物的序列为：

TGGATACCCAAATGTGTGGAC；

所述副流感病毒Ⅲ型探针的序列为：

CGGAAGAAACAATTCAACAATTGAAGACC；

所述副流感病毒Ⅰ型上游引物序列中的第10位碱基G为锁核酸修饰碱；

所述副流感病毒Ⅰ型下游引物序列中的第9位碱基T为锁核酸修饰碱基；

所述副流感病毒Ⅰ型探针序列中的第5为碱基C为修饰荧光基团，第15位碱基A修饰淬灭基团，第23位A碱基为磷酸化碱基；

和；

所述呼吸道腺病毒上游引物序列中的第13位碱基T为锁核酸修饰碱；

所述呼吸道腺病毒下游引物序列中的第15位碱基A为锁核酸修饰碱基；

所述呼吸道腺病毒探针序列中的第9为碱基A为修饰荧光基团，第18位碱基C修饰淬灭基团，第29位A碱基为磷酸化碱基；

和；

所述人偏肺病毒上游引物序列中的第10位碱基C为锁核酸修饰碱；

所述人偏肺病毒下游引物序列中的第14位碱基T为锁核酸修饰碱基；

所述人偏肺病毒探针序列中的第10为碱基T为修饰荧光基团，第22位碱基G修饰淬灭基团，第33位C碱基为磷酸化碱基；

所述呼吸道合胞病毒上游引物序列中的第13位碱基G为锁核酸修饰碱；

所述呼吸道合胞病毒下游引物序列中的第17位碱基T为锁核酸修饰碱基；

所述呼吸道合胞病毒探针序列中的第6为碱基A为修饰荧光基团，第15位碱基C修饰淬灭基团，第23位G碱基为磷酸化碱基；

和；

所述副流感病毒Ⅱ型上游引物序列中的第19位碱基A为锁核酸修饰碱；

所述副流感病毒Ⅱ型下游引物序列中的第11位碱基G为锁核酸修饰碱基；

所述副流感病毒Ⅱ型探针序列中的第14为碱基T为修饰荧光基团，第20位碱基C修饰淬灭基团，第27位T碱基为磷酸化碱基；

和；

所述副流感病毒Ⅲ型上游引物序列中的第13位碱基C为锁核酸修饰碱；

所述副流感病毒Ⅲ型下游引物序列中的第13位碱基T为锁核酸修饰碱基；

所述副流感病毒Ⅲ型探针序列中的第9为碱基A为修饰荧光基团，第23位碱基G修饰淬灭基团，第29位C碱基为磷酸化碱基；

所述内参上游引物的序列为AGATTTGGACCTGCGAGCG；

所述内参下游引物的序列为GAGCGGCTGTCTCCACAAGT；

所述内参探针的序列为TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG，其中，第7位碱基C修饰荧光基团，第16位碱基T修饰为淬灭基团，第23位碱基G为磷酸化碱基；

其中，所述酶混合液中的DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶和Tth DNA酶的组合。