[发明专利]一种利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法

权利要求书

1.一种利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，以玉米芯碱抽提剩余物为碳源，以里氏木霉为产酶菌株，进行发酵产酶，获得酶液；直接利用该酶液对含半乳甘露聚糖的原料进行酶解，获得小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖。

2.根据权利要求1所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，在使用玉米芯碱抽提剩余物前，采用蒸馏水对剩余物进行多次洗涤，干燥备用。

3.根据权利要求2所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，玉米芯碱抽提剩余物水洗涤获得的废水在经过蒸发浓缩过滤后形成高浓度的碱液，重复用于玉米芯碱抽提，实现碱液的循环利用。

4.根据权利要求1所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，以玉米芯碱抽提剩余物为碳源时，玉米芯碱抽提剩余物的浓度为15～30g/L。

5.根据权利要求1所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，所得酶液中β-甘露聚糖酶酶活力不低于1.5U/mL，α-半乳糖苷酶活力不高于为0.06U/mL，β-甘露聚糖酶活力不高于为0.03U/mL。

6.根据权利要求1所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，含半乳甘露聚糖的原料为田菁种子，经机械粉碎至20～100目，按1∶50固液比加入蒸馏水，于50℃抽提24h后，于10000转/分条件下离心10min获得上清液，并向上清液中加入无水乙醇，所得沉淀物经真空干燥得到半乳甘露聚糖粉状固体，用于酶解制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖。

7.根据权利要求6所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，取半乳甘露聚糖粉状固体，直接加入酶液、蒸馏水、1mol/L柠檬酸缓冲液，充分混合均匀，于底物浓度2％、酶加量20U/g半乳甘露聚糖、pH值4.8、50℃条件下反应24h；酶水解反应结束后，将酶水解物置于100℃下处理10min从而使酶失活，失活的酶解液于10000转/分条件下离心10min，上清液即为含小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的酶解液。

8.根据权利要求1所述利用玉米芯碱抽提剩余物制备小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖的方法，其特征在于，步骤如下：

1)碱抽提玉米芯获得剩余物，用蒸馏水对剩余物进行多次洗涤，回收洗涤水，浓缩后循环用于碱抽提玉米芯，获得的剩余物干燥备用；

2)以步骤1)处理后的剩余物为碳源配置发酵培养基，按10％的接种量接入里氏木霉孢子，置于28-30℃、170转/分的恒温摇床中培养4天，进行发酵产酶，获得酶液；其中，剩余物的浓度为15～30g/L，所得酶液中β-甘露聚糖酶酶活力不低于1.5U/mL，α-半乳糖苷酶活力不高于为0.06U/mL，β-甘露聚糖酶活力不高于为0.03U/mL。

3)取田菁种子，经机械粉碎至20～100目，按1∶50固液比加入蒸馏水，于50℃抽提24h后，于10000转/分条件下离心10min获得上清液，并向上清液中加入无水乙醇，所得沉淀物经真空干燥得到半乳甘露聚糖粉状固体；直接利用步骤2)制备的酶液对半乳甘露聚糖粉状固体进行酶解，底物浓度2％、酶加量20U/g半乳甘露聚糖、pH值4.8、50℃条件下反应24h；酶水解反应结束后，将酶水解物置于100℃下处理10min从而使酶失活，失活的酶解液于10000转/分条件下离心10min，获得上清液，采用乙醇分级沉淀，即获得小分子半乳甘露聚糖和半乳甘露低聚糖，其中，半乳甘露低聚糖的分子量小于3000Da，小分子半乳甘露聚糖的分子量在3000到20000Da。

9.一种制备β-甘露聚糖酶的方法，其特征在于，以玉米芯碱抽提剩余物为碳源，以里氏木霉为产酶菌株，进行发酵产酶，获得酶液；所得酶液中β-甘露聚糖酶酶活力不低于1.5U/mL，α-半乳糖苷酶活力不高于为0.06U/mL，β-甘露聚糖酶活力不高于为0.03U/mL。