[发明专利]一种α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202111008555.7 | 申请日： | 2021-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN113699131B | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 楼志华;徐俭;刘翔 | 申请（专利权）人： | 江苏省奥谷生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市百拓共享专利代理事务所(特殊普通合伙) 44497 | 代理人： | 卢刚 |
| 地址： | 213300 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 环糊精 葡萄 糖基转移酶 突变体 及其 应用 | ||
1.一种α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体，其特征在于，是通过将氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的野生型α-环糊精葡萄糖基转移酶的第447位的甘氨酸突变成谷氨酸、第474位的丝氨酸突变成天冬氨酸、将第659位的甘氨酸突变成精氨酸、同时将第430位的丙氨酸突变成半胱氨酸与第451位的丝氨酸突变成半胱氨酸得到的G447E/S474D/G659R/A430C/S451C突变体，所述G447E/S474D/G659R/A430C/S451C突变体的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。
2.编码权利要求1所述α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体的基因，具有如SEQ ID No:3所示的核苷酸序列。
3.携带权利要求2所述基因的重组质粒。
4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的载体为pET载体、pPICZ载体或pUB载体。
5.表达权利要求1所述α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为细菌或真菌，其外源转入了权利要求4所述的重组质粒。
6.一种α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求3或4所述重组质粒导入表达宿主E.coliBL21(DE3)，挑选验证后的阳性单克隆进行诱导表达培养；离心收集上清，层析纯化得到α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体酶。
7.权利要求1所述α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体、权利要求2所述基因、权利要求3或4所述重组质粒、权利要求5所述宿主细胞或者权利要求6所述方法制备得到α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体酶在生产α-环糊精中的应用。
8.一种生产α-环糊精的方法，其特征在于，利用权利要求1所述α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体或者权利要求6所述方法制备得到的α-环糊精葡萄糖基转移酶突变体酶，将淀粉转化为α-环糊精，反应过程中不进行二次加酶。
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