[发明专利]一种用于鉴别青脆李品种的SSR分子标记引物及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴别青脆李品种的SSR分子标记引物，其特征在于：包括引物对PSR1-eg、PSR2-eg和PSR3-eg，其中：

引物对PSR1-eg的序列分别为：

上游引物PSR1-egF：CAGTTTGATTTGTGTGCCTCTC，

下游引物PSR1-egR： GATCCACCCTTTGCATAAAATC；

引物对PSR2-eg的序列分别为：

上游引物PSR2-egF： GCCACCAATGGTTCTTCC，

下游引物PSR2-egR：AGCACCAGATGCACCTGA；

引物对PSR3-eg的序列分别为：

上游引物PSR3-egF： ACGGTATGTCCGTACACTCTCCATG，

下游引物PSR3-egR： CAACCTGTGATTGCTCCTATTAAAC。

2.一种利用权利要求1所述的SSR分子标记引物鉴别青脆李品种的方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）提取待测样品的DNA；

2）以步骤1）提取的DNA为模板，利用SSR分子标记的引物组，对其进行一次PCR扩增；

3）以步骤2）一次PCR扩增产物为基础，用带荧光的SSR分子标记引物组在与一次PCR扩增相同的体系与程序进行二次PCR扩增，采取荧光毛细管电泳系统检测二次PCR扩增产物，得到二次PCR扩增产物的荧光毛细管电泳图；

4）将步骤3）中获得的待测样品的二次PCR扩增产物荧光毛细管电泳图与青脆李标准图谱对照，鉴别青脆李品种。

3.根据权利要求3中所述的一种利用SSR分子标记引物鉴别青脆李品种的方法，其特征在于：所述步骤4）中青脆李品种包括田坎麻李、大白李、羌脆李和巴山脆李。

4.根据权利要求3中所述的一种利用SSR分子标记引物鉴别青脆李品种的方法，其特征在于：所述一次PCR扩增采用的是15μL的PCR反应体系，包括10μmol/L的含接头的上游引物、含接头的下游引物各1μL，7.5μL酶mix，1μLDNA模板以及4.5μLddH₂O。

5.根据权利要求3中所述的一种利用SSR分子标记引物鉴别青脆李品种的方法，其特征在于：所述一次PCR扩增采用的程序为：94℃预变性5min；94℃变性30S，60℃退火30S，72℃延伸30S，共30个循环；最后72℃延伸5min；延伸后于4℃保存PCR扩增产物。

6.根据权利要求3中所述的一种利用SSR分子标记引物鉴别青脆李品种的方法，其特征在于：所述步骤3）中，带荧光的SSR分子标记引物对的荧光染色基团为HEX或FAM。

7.一种权利要求1所述的SSR分子标记引物在青脆李品种的遗传多样性检测、遗传种质鉴定、遗传连锁图谱构建、基因定位与标记辅助育种中的应用。