[发明专利]一种同型半胱氨酸试剂盒及其制备方法

说明书

本发明是关于一种同型半胱氨酸试剂盒及其制备方法，该同型半胱氨酸试剂盒包括：还原试剂、酶试剂、发光酶试剂及磁珠试剂，四者的体积比例为(0.5‑10)：(0.5‑10)：(0.5‑10)：(0.5‑25)；其中，所述还原试剂的组成为：三(2‑羧乙基)膦0.01‑0.55wt％、二硫苏糖醇0.05‑0.08wt％、β‑巯基乙醇0.1‑0.2mol/L、异硫氰酸胍0.01‑0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠0.02‑0.8wt％、十二烷基硫酸钠0.01‑0.05wt％，pH值为7.4‑8.3；所述酶试剂为S‑腺苷‑同型半胱氨酸水解酶。本发明提供的试剂盒灵敏度较传统的同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒(酶循环法)灵敏度提高近50倍。

技术领域

本发明涉及一种同型半胱氨酸试剂盒及其制备方法，属于免疫检测技术领域。

背景技术

同型半胱氨酸(HCY)是一种含巯基的氨基酸，主要来源于饮食摄取的蛋氨酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中一个重要的中间产物，其本身并不参加蛋白质的合成。在体内，约1/2的HCY和甲基四氢叶酸在蛋氨酸合成酶(Methionine Synthase reductase，MS)的作用下，生成蛋氨酸和四氢叶酸，四氢叶酸在N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetralydrofolate， MTHFR)的作用下生成甲基四氢叶酸；其余约1/2的Hcy通过转硫基途径，即HCY与丝氨酸在胱硫醚β合成酶(Cystathionineβ-synthase，CBS)作用下形成胱硫醚，一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸，最后生成丙酮酸、硫酸和水，此过程需维生素B6为辅酶及丝氨酸羟甲基转移酶，另一部分则生成同型丝氨酸。任何原因引起前两条代谢途径障碍时，升高的HCY在氨基酰-tRNA合成酶的作用下，生成同型半胱氨酸硫内酯 (homocysteine thiolactone，HTL)，HTL是HCY在氨基酰-tRNA合成酶编辑或校正过程中形成的反应产物，属一种环硫酯。

相关临床资料显示HCY水平与心血管疾病密切相关，是心血管疾病发病的一个重要危险因子，血液中增高的HCY因为刺激血管壁引起动脉血管的损伤，导致炎症和管壁的斑块形成，最终引起心脏血流受阻。高同型半胱氨酸尿症患者，由于严重遗传缺陷影响HCY代谢，造成高HCY血症。轻微的遗传缺陷或维生素B营养缺乏会伴随中度或轻度的HCY升高，也会增加心脏病的危险。HCY升高还可引起神经管畸形等出生缺陷类疾病。因此，测定血液中tHCY浓度在临床上意义十分重要。现有技术的同型半胱氨酸(HCY)测定试剂盒(酶循环法)，其中氧化型同型半胱氨酸经三乙羧乙基膦(TCEP)还原成游离型HCY，游离型HCY与底物发生反应，循环放大；通过检测反应中NADH转化为NAD+吸光度降低的速率，可以计算出待测物中HCY的浓度；但该酶循环法检测HCY的浓度灵敏度低，在临床意义附近测试值重复性偏差大，当测试值≤12μmol/L时的相对偏差大于15％；线性范围窄，最高只检测到50μmol/L的样本，且只能在生化仪这个平台使用。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种同型半胱氨酸试剂盒及其制备方法，所解决的技术问题是通过磁微粒化学发光法制备同型半胱氨酸试剂盒。此方法快捷、操作简单、自动化程度高，适合大多数临床实验室应用。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种同型半胱氨酸试剂盒，其包括：还原试剂、酶试剂、发光酶试剂及磁珠试剂，四者的体积比例为(0.5-10)：(0.5-10)：(0.5-10)： (0.5-25)；

其中，所述还原试剂的组成为：三(2-羧乙基)膦(TCEP)0.01-0.55wt％、二硫苏糖醇(DTT)0.05-0.08wt％、β-巯基乙醇0.1-0.2mol/L、异硫氰酸胍 0.01-0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na)0.02-0.8wt％、十二烷基硫酸钠(SDS)0.01-0.05wt％，pH值为7.4-8.3；

所述酶试剂为重组的S-腺苷-同型半胱氨酸水解酶；

所述发光酶试剂为同型半胱氨酸单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物；