[发明专利]一种同型半胱氨酸试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，包括：还原试剂、酶试剂、发光酶试剂及磁珠试剂，四者的体积比例为(0.5-10)：(0.5-10)：(0.5-10)：(0.5-25)；

其中，所述还原试剂包含：三(2-羧乙基)膦0.01-0.55wt％、二硫苏糖醇0.05-0.08wt％、β-巯基乙醇0.1-0.2mol/L、异硫氰酸胍0.01-0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠0.02-0.8wt％、十二烷基硫酸钠0.01-0.05wt％，pH值为7.4-8.3；

所述酶试剂为S-腺苷-同型半胱氨酸水解酶；

所述发光酶试剂为同型半胱氨酸单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物；

所述磁珠试剂由体积比例为(0.1-5):(0.5-10)的链霉亲和素包被的磁珠和生物素化的同型半胱氨酸组成。

2.如权利要求1所述的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述还原试剂包含：三(2-羧乙基)膦0.01wt％、二硫苏糖醇0.05wt％、β-巯基乙醇0.1mol/L、异硫氰酸胍0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠0.8wt％、十二烷基硫酸钠0.05wt％，pH值为8.3。

3.如权利要求1所述的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述还原试剂包含：三(2-羧乙基)膦0.05wt％、二硫苏糖醇0.05wt％、β-巯基乙醇0.2mol/L、异硫氰酸胍0.1mol/L、乙二胺四乙酸二钠0.2wt％、十二烷基硫酸钠0.25wt％，pH值为8.0。

4.如权利要求1所述的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述还原试剂包含：三(2-羧乙基)膦0.55wt％、二硫苏糖醇0.08wt％、β-巯基乙醇0.1mol/L、异硫氰酸胍0.01mol/L、乙二胺四乙酸二钠0.02wt％、十二烷基硫酸钠0.01wt％，pH值为7.4。

5.如权利要求1所述的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述同型半胱氨酸试剂盒还包括校准品、质控品、发光底物试剂及清洗液。

6.如权利要求1所述的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述磁珠为1-5μm的羧基磁珠。

7.一种权利要求1-6任一项所述的同型半胱氨酸试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)还原试剂的制备：配制包含0.01-0.55wt％三(2-羧乙基)膦、0.05-0.08wt％二硫苏糖醇、0.1-0.2mol/Lβ-巯基乙醇、0.01-0.2mol/L异硫氰酸胍、0.02-0.8wt％乙二胺四乙酸二钠、0.01-0.05wt％十二烷基硫酸钠，pH值为7.4-8.3的溶液；

2)发光酶试剂的制备：将重量比例为(1-5):(0.2-60)的抗同型半胱氨酸单克隆抗体与碱性磷酸酶复合物偶联，得到同型半胱氨酸单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物；

3)磁珠试剂的制备：将重量比例为(1-10)：(0.5-100)的链霉亲和素与磁珠微球偶联，得到链霉亲和素包被的磁珠；将重量比例为(1-10)：(0.2-50)的生物素与同型半胱氨酸偶联，得到生物素化的同型半胱氨酸；将链霉亲和素包被的磁珠与生物素化的同型半胱氨酸按(0.1-5):(0.5-10)的体积比例混合，即得所述磁珠试剂。

8.如权利要求7所述的同型半胱氨酸试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述发光酶试剂的制备具体包括：

①碱性磷酸酶活化、离心弃上清，用缓冲液重复清洗；

②加入偶联剂温育后离心，弃上清；

③抗同型半胱氨酸单克隆抗体加入缓冲液过纯化柱；

⑤抗同型半胱氨酸单克隆抗体过透析膜，浓缩；

⑥向步骤②中加入步骤⑤中的抗同型半胱氨酸单克隆抗体，混匀，温育，离心，弃上清加入稀释液；

⑦加入封闭液混匀，清洗离心；

⑧弃上清加入保存液保存。