[发明专利]一种具有抑制念珠菌生长繁殖作用的订书肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及多肽药物领域，具体是一种具有抑制念珠菌生长繁殖作用的订书肽及其制备方法和应用。本发明以氨基树脂为载体，按照直连肽模板Aurein1.2：Ac‑GLFDIIKKIAESF‑NH₂氨基酸序列在DIC‑Oxime缩合体系中，通过Fmoc固相合成法，合成得到肽链，并且在保留关键氨基酸残基的基础上，在特定位置用S₅代替原有的氨基酸，连接在树脂上直链肽在GrubbsⅠ试剂的二氯乙烷溶液中进行烯烃复分解反应环合后，从树脂上切下得到目标订书肽。本发明的方法简单易行，纯度高，产率高。进一步的实验证实，本发明的订书肽可以显著抑制真菌的生长、繁殖，在治疗念珠菌感染疾病方面具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及多肽药物领域，具体地说，是一种具有抑制念珠菌生长繁殖作用的订书肽及其制备方法和应用。

背景技术

近年来,随着化疗、糖皮质激素及免疫抑制剂的广泛应用,机会性真菌感染的发生率不断增加,念珠菌是临床上引起机会性真菌感染最常见的病原菌。菌种通过侵犯宿主的粘膜和组织致病，引发局部及全身的炎症反应,严重威胁人类生命与健康。常见的念珠菌血症就是由念珠菌引起的血液感染,称为临床第四大血流感染疾病，具有相当高的死亡率，发病率也逐年上升，目前临床上可用的抗真菌药物种类有限，抗菌谱窄、耐药性高，毒副作用明显，念珠菌血症难以很好的控制，为临床治疗带来了严峻挑战。设计、合成具有抑制念珠菌生长、繁殖的多肽药物，有助于为诊断、预防和治疗念珠菌病提供新的理论策略。真菌病对人类的生命健康具有重要影响，目前临床常见的抗真菌药物也存在一定的缺陷，比如氟胞嘧啶因其极易引起继发性耐药而通常与其他抗真菌药联用，较少单独使用。两性霉素B，主要用于治疗深部真菌感染，其抗菌作用强，但毒副作用大，限制了其临床应用。

本申请发明人在现有技术披露的众多信息中注意到，有文献报道Aurein1.2直连肽具有一定的抑菌作用，而在直连肽的基础上适当优化可得到活性更好，稳定性更高的多肽药物(Li,X.,et al.,Stapled Helical Peptides Bearing Different AnchoringResidues.Chem Rev,2020.120(18):p.10079-10144)。因此，本申请发明人推测将Aurein1.2进行修饰，设计合成一系列的订书肽，从而达到提高Aurein1.2抑菌活性的目的。

生物体内蛋白质之间的相互作用在生命过程中起着至关重要的作用。通过人工合成分子来调控蛋白-蛋白相互作用界面是一种有效的策略，其已经广泛地应用于药物化学中以进行疾病干预，其中人工合成多肽即为调控蛋白间相互作用的一种重要手段。但因存在稳定性低，透膜性差等问题，当前，多肽类药物在临床上的应用受到了较大的限制。应用全碳骨架形成侧链环合结构改造多肽来稳定α-螺旋肽的活性构象，即订书肽(stapledpeptide)，成为克服这一缺陷的最直接最有效方法。有文献报道出Aurein1.2的抗菌活性及可能的机制研究，但未见对其订书肽的相关研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种具有抑制念珠菌生长繁殖作用的订书肽及其制备方法和应用。

本发明的第一方面，提供一种订书肽，是以直连肽Aurein1.2：Ac-GLFDIIKKIAESF-NH₂(SEQ ID NO.1)为肽链模板，氨基酸序列设计并合成9条订书肽。

所述的订书肽选自下列中的一种：

a)以Ac-GLFDIIKKIAESF-NH₂为肽链模板，其中1_G和5_I被S₅替换并环合；

b)以Ac-GLFDIIKKIAESF-NH₂为肽链模板，其中2_L和6_I被S₅替换并环合；