[发明专利]一种液态稳定的5’-核苷酸酶校准品及检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种液态稳定5’‑核苷酸酶校准品，所述校准品的组分包括缓冲液、稳定剂、防腐剂、5’‑核苷酸酶。本发明还公开了一种5’‑核苷酸酶检测试剂盒，所述试剂盒包括5’‑核苷酸酶R1试剂、5’‑核苷酸酶R2试剂。所述5’‑核苷酸酶R1试剂为酶反应系统，由第一缓冲液、稳定剂、第一防腐剂、4‑氨基安替比林、酶激活剂、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、黄嘌呤氧化酶(XOD)和过氧化物酶(POD)组成；所述5’‑核苷酸酶R2试剂为显色系统，由第二缓冲液、第二防腐剂、肌苷‑5'‑磷酸二钠盐、β‑甘油磷酸钠和Trinder显色底物组成。本发明还公开了上述5’‑核苷酸酶检测试剂盒在测定5’‑核苷酸酶中的应用。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，涉及一种液态稳定的5’-核苷酸酶校准品和检测试剂盒及其应用。

背景技术

5’-核苷酸酶(5’-Nucleotidase，5’-NT)是催化核苷酸分子中磷酸键水解的一种特异性磷酸酶，在细胞生长、运动、纤维蛋白合成、神经传递、提高表皮或内皮屏障功能及淋巴细胞的黏附、再循环、免疫应答等方面均发挥重要作用。人血清5’-核苷酸酶作为一种糖蛋白，由两个分子量为70000D的亚基组成，是含有一个疏水结构的二聚体。最适pH为6.6-7.0，受Mg²⁺或Mn²⁺激活，受Ni²⁺抑制。

5’-核苷酸酶广泛存在于组织的细胞膜上，除存在于肝胆外，还常见于脑、心、肺、小肠、肾小管等。但释放入血循环中的5’-NT仅来源于肝胆组织：在肝内5’-NT分布于胆小管、肝窦和Kupfer细胞，当肝细胞受损或肝内外梗阻时，肝细胞内质网的膜结构破坏明显，线粒体发生退行性改变甚至消失，合成机制发生障碍，肝细胞受到损伤，5’-NT才释放入血液中，导致血清5’-NT水平升高。

由于血清中的5’-核苷酸酶容易发生衰减无法进行长期保存，所以市面上所售的校准品均为冻干剂型。因此发明一种液态稳定的5’-核苷酸酶校准品，将具有非常好的临床实用性，也非常利于临床的推广发展。同时5’-核苷酸酶校准品的配方也可适用于液体状态下不稳定的其它酶类。

目前临床上对于5’-NT的测定多采用酶法，该方法简便快捷且结果相对可靠，对肝胆疾病的诊断具有较高的应用价值。但是该方法存在所使用的嘌呤核苷磷酸化酶和黄嘌呤氧化酶稳定性较差，同时还存在血清中的ALP会对整体反应产生干扰现象。另一方面目前现有5’-核苷酸酶校准品及其检测试剂盒的有效期一般为12个月，有效期相对不够长。

发明内容

为了解决现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种首创的液态稳定5’-核苷酸酶校准品，突破了现有5’-核苷酸酶校准品均为冻干剂型且效期较短的技术壁垒，同时也避免了在使用过程中需要溶解导致人为误差被放大的问题。

本发明还提供了一种稳定性好、抗干扰能力强、重复性好，能真实反映5’-核苷酸酶活性并能用于全自动生化分析仪的检测试剂盒。

本发明提供的所述液态稳定5’-核苷酸酶校准品是由缓冲液、稳定剂、防腐剂和5’-核苷酸酶组成。

所述缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、MOPS缓冲液、BES缓冲液中的一种或者多种的组合；优选地，为Tris-HCl缓冲液。

所述缓冲液的摩尔浓度为10-100mmol/L，pH为6.0-9.0；优选地，所述缓冲液的摩尔浓度为10-50mmol/L，pH为7.50。

所述稳定剂包括牛血清白蛋白(BSA)、甘油、海藻糖、Prionex中的一种或多种；优选地，为Prionex。

所述稳定剂的质量浓度为0.1％-20.0％；优选地，为1.0％-10.0％。

所述稳定剂主要可以使液态5’-核苷酸酶校准品在保存期内性能保持稳定，保证各组分中酶的性能稳定。