[发明专利]LncRNA ANRIL在儿童急性淋巴细胞白血病中的临床应用

权利要求书

1.一种调控基因的表达体，其特征在于，所述调控基因的表达体为LncRNA ANRIL。

2.一种由权利要求1所述的调控基因的表达体的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，所述确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法包括以下步骤：

步骤一，进行RNA提取及qRT-PCR；

步骤二，进行细胞培养；

步骤三，进行RNAi实验；

步骤四，进行细胞增殖及凋亡测定；

步骤五，进行统计学分析。

3.如权利要求2所述的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，步骤一中，所述RNA提取及qRT-PCR，包括：

(1)使用Trizol试剂提取细胞中的总RNA，对提取的总RNA使用Nanodrop检测仪进行RNA浓度检测和纯度鉴定；

(2)利用反转录试剂盒反转总RNA成单链cDNA，利用PCR扩增仪进行cDNA扩增，根据GeneBank数据库中序列设计引物；

(3)使用SYBR Green染料法于StepOnePlus^TMReal-Time PCR Systems定量PCR仪检测基因的表达，采用方法计算基因表达的相对比值，其中GAPDH为内参基因，每个样本至少重复3次。

4.如权利要求3所述的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，所述引物ANRIL的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，引物KLF2的核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示，引物p21的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，引物INK4B的核苷酸序列如SEQ IDNO：4所示。

5.如权利要求2所述的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，步骤二中，所述细胞培养，包括：

在5％CO₂的37℃的潮湿培养箱中，采用含有10％胎牛血清、1μg/mL嘌呤霉素的RPMI-1640培养基培养细胞，每隔2天更换培养液。

6.如权利要求2所述的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，步骤三中，所述RNAi实验，包括：

(1)根据ANRIL的核苷酸序列设计靶向ANRIL的特异siRNA，包括Si-ANRIL-1和Si-ANRIL-2，同时设计一组scrambled nucleotide序列作为阴性对照，细胞系在相应培养基中培养；

(2)使用将siRNA转染至细胞内；

(3)Amaxa Nucleofector细胞核转染系统综合应用电穿孔技术及细胞特异性细胞核转染液，直接把外源基因导入原代细胞及细胞系的细胞浆及细胞核中；

(4)转染完成后，细胞继续培养48h，测定转染效率后收集细胞用于后续qRT-PCR实验。

7.如权利要求6所述的确定LncRNA ANRIL在ALL细胞系中的表达模式的方法，其特征在于，所述Si-ANRIL-1的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述Si-ANRIL-2的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。