[发明专利]一种重组枯草芽孢杆菌及制备的转氨酶和应用

权利要求书

1.一种重组枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：将如SEQ ID NO：1所示的生物酶基因连接到pHT43质粒的BamHI和ZraI位点，然后转化到Bacillus subtilisATCC6633中进行表达，即得重组枯草芽孢杆菌。

2.采用权利要求1所述的制备方法获得的重组枯草芽孢杆菌。

3.采用权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌制得的转氨酶，其特征在于：转氨酶核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.权利要求3所述的转氨酶的制备方法，其特征在于：将权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌，接种至LB液体培养基中，接种量为培养基体积的1～5％，37℃的条件下，220rpm摇床中过夜培养后，作为种子液；将新鲜的种子液接入TB培养基中发酵培养，37℃的条件下，220rpm摇床中培养至OD₆₀₀在0.6～0.8时向培养基中加入IPTG，IPTG的浓度为0.5mM，再于18℃诱导22h；发酵液诱导结束后，于4℃，12000rpm离心5min，分别收集菌体与上清液；将上清液加入饱和硫酸铵进行沉淀，4℃，12000rpm离心5min收集沉淀并冻干，获得转氨酶粗酶。

5.权利要求3所述的转氨酶在合成西他列汀中的应用，其特征在于：由化合物II作为起始原料，在缓冲液、助溶剂、辅酶PLP、氨基供体的存在下，经转氨酶催化转化为化合物I，即西他列汀，其反应路线为，

6.根据权利要求5所述的转氨酶在合成西他列汀中的应用，其特征在于：所述助溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸丁酯、DMSO中的任一种；所述缓冲液为1M的pH8.0～8.5异丙胺盐酸盐缓冲液；所述氨基供体为异丙胺盐酸盐缓冲液中的异丙胺。

7.根据权利要求5所述的转氨酶在合成西他列汀中的应用，其特征在于：所述助溶剂与缓冲液的体积比为1:100。

8.根据权利要求5所述的转氨酶在合成西他列汀中的应用，其特征在于：催化反应时，反应温度为20～40℃。

9.权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌在处理合成西他列汀时的酶催化废水中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)所述重组枯草芽孢杆菌在外泌酶后收集菌体；

(2)合成西他列汀时的酶催化废水经过减压蒸馏回收有机助溶剂，然后加入步骤(1)收集的菌体，所述菌体与废水的质量比为1：10～100；反应温度为30～40℃。