[发明专利]番茄花叶病毒的RT-RAA-LFS快速可视化检测引物、探针和试剂盒及应用

权利要求书

1.一种番茄花叶病毒的RT-RAA-LFS快速可视化检测引物、探针，其特征在于包括根据番茄花叶病毒的运动蛋白和外壳蛋白区段设计特异性引物及荧光探针，引物序列具体如下：上游引物ToMV-RAA-F5：AGTGCGGGCTACTGCCCTTTGTCATTAGAA；下游引物ToMV-RAA-R5：Biotin-TATTTTTCGGACCTCTTTTTGAGGATTTGGT；探针ToMV-probe-5：FAM-TAATATAAAATTGGGTTTGAGGGAGAAAGTA(THF)CGAGTGTGAACGATGGA-C3-pacer。

2.一种番茄花叶病毒的RT-RAA-LFS快速可视化检测试剂盒，其特征在于该试剂盒包括反应体系如下：29.4 μL A 缓冲液，2.1 μL 10 μM的上游引物，3 μL10 μM的下游引物，0.6μL10 μM的探针，1 μL RNA模板，11.4 μL ddH₂O，2.5 μL B 缓冲液，总体积为50 μL，其中引物序列具体如下：上游引物ToMV-RAA-F5：AGTGCGGGCTACTGCCCTTTGTCATTAGAA；下游引物ToMV-RAA-R5：Biotin-TATTTTTCGGACCTCTTTTTGAGGATTTGGT；探针ToMV-probe-5：FAM-TAATATAAAATTGGGTTTGAGGGAGAAAGTA(THF)CGAGTGTGAACGATGGA-C3-pacer。

3.权利要求1所述的番茄花叶病毒的RT-RAA-LFS快速可视化检测引物、探针的应用，其特征在于用于检测番茄花叶病毒包括以下步骤：

（1）配制混合液：将29.4 μL A缓冲液，2.1 μL 10 μM的上游引物，3 μL10 μM的下游引物，0.6 μL10 μM的探针，1 μL RNA模板，11.4 μL ddH₂O，2.5 μL B缓冲液加入离心管混合后瞬时离心，用移液器将混合液全部转移至RNA恒温快速扩增试剂盒的MIRA反应单元，枪头轻轻吹打，待管内干粉充分溶解后，瞬时离心；

（2）立即将反应管放入恒温金属浴中，39 ℃孵育30 min；

（3）反应结束后，从每个反应管中取出5 μL反应液转至新的离心管中，用ddH₂O稀释至50μL，吹打混匀；

（4）将侧流层析试纸条结合垫部分浸入液面，待液体向上层析过质控线，取出试纸条平置，5 min内读取检测结果并拍照记录。