[发明专利]一种预放大核酸及其应用

说明书

本发明公开了一种预放大核酸及其应用，预放大核酸包括5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列；5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列依次相接；第一互补区和第二互补区配对；5’端碱基序列和3’端碱基序列均与检测探针配对；5’端碱基序列的Tm值和3’端碱基序列的Tm值相差≤1℃；重复序列和标记探针或放大核酸配对；预放大核酸用于对目标核酸进行信号放大检测；通过第一互补区和第二互补区配对，重复序列形成茎环状的二级结构从而可以增加放大倍数，同时预放大核酸的二级结构更加稳定，并不易增加非特异杂交产生的背景信号，从而改善检测的信噪比。

技术领域

本发明涉及一种预放大核酸及其应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

PCR技术以扩增待测目标为手段做核酸检测，但易受到非特异杂交和污染的影响产生假阳性结果。上世纪九十年代发明了bDNA技术，它通过探针组杂交到目标核酸，而后通过预放大和放大两种单链核酸的级联杂交进行信号放大，避免了假阳性的产生。

bDNA技术以单链预放大核酸的一端杂交于检测探针，其另一端为短重复序列；接着再以单链放大核酸的一端杂交于预放大核酸的短重复序列，而放大单链核酸的另一端也为短重复序列，可用于结合某种标记的标记探针。通过这种方式，bDNA技术做到了将检测信号放大而无须像PCR一样做目标核酸的扩增，从而避免了检测的假阳性。但由于此杂交复合物过于庞大，因此并不能只靠简单的20-30碱基的杂交结合来稳定整个杂交复合物，其放大倍数在实际应用中也受到了限制，且产生的背景问题也会导致信噪比下降，因而b-DNA技术并未能象PCR技术一样得到广泛应用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种预放大核酸，通过第一互补区和第二互补区配对，重复序列形成茎环状的二级结构从而可以增加放大倍数，同时预放大核酸的二级结构更加稳定，并不易增加非特异杂交产生的背景信号，从而改善检测的信噪比。

本发明的第二个目的在于提供一种上述预放大核酸的应用。

实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种预放大核酸，包括5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列；5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列依次相接；第一互补区和第二互补区配对；5’端碱基序列和3’端碱基序列均与检测探针配对；5’端碱基序列的Tm值和3’端碱基序列的Tm值相差≤1℃；重复序列和标记探针或放大核酸配对。

进一步地，5’端碱基序列与3’端碱基序列的互补结合位点≤4个连续碱基；第一互补区和第二互补区分别与5’端碱基序列的互补结合位点均≤4个连续碱基；第一互补区和第二互补区分别与3’端碱基序列的互补结合位点均≤4个连续碱基。

进一步地，5’端碱基序列与3’端碱基序列不能互补结合。

进一步地，第一互补区和第二互补区的Tm值与，5’端碱基序列或3’端碱基序列的Tm值相差≤1℃。

进一步地，5’端碱基序列和3’端碱基序列的长度均为20-40个碱基。

进一步地，第一互补区和第二互补区的长度均为26-34个碱基。

进一步地，5’端碱基序列的Tm值和3’端碱基序列的Tm值均为65-67℃。

进一步地，5’端碱基序列和3’端碱基序列分别和一个独立的检测探针配对。

进一步地，重复序列为至少5段。

进一步地，重复序列为5-160段。

进一步地，重复序列为18-25个碱基。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种预放大核酸的应用，将如上所述的预放大核酸用于对目标核酸进行信号放大检测。