[发明专利]一种预放大核酸及其应用

权利要求书

1.一种预放大核酸，其特征在于，包括5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列；所述5’端碱基序列、第一互补区、重复序列、第二互补区和3’端碱基序列依次相接；所述第一互补区和第二互补区配对；所述5’端碱基序列和3’端碱基序列均与检测探针配对；所述5’端碱基序列的Tm值和3’端碱基序列的Tm值相差≤1℃；所述重复序列和标记探针或放大核酸配对；第一互补序列和第二互补序列之间的重复序列形成茎环状的二级结构。

2.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述5’端碱基序列与3’端碱基序列的互补结合位点≤4个连续碱基；所述第一互补区和第二互补区分别与5’端碱基序列的互补结合位点均≤4个连续碱基；所述第一互补区和第二互补区分别与3’端碱基序列的互补结合位点均≤4个连续碱基。

3.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述第一互补区和第二互补区的Tm值与5’端碱基序列或3’端碱基序列的Tm值相差≤1℃。

4.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述5’端碱基序列和3’端碱基序列的长度均为20-40个碱基。

5.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述5’端碱基序列的Tm值和3’端碱基序列的Tm值均为65-67℃。

6.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述重复序列为至少5段。

7.如权利要求1所述的预放大核酸，其特征在于，所述重复序列为18-25个碱基。

8.一种预放大核酸的应用，其特征在于，将如权利要求1所述的预放大核酸用于对目标核酸进行信号放大检测。

9.如权利要求8所述的预放大核酸的应用，其特征在于，所述对目标核酸进行信号放大检测包括：

第一杂交步骤：将检测探针的一端与目标核酸结合；

第二杂交步骤：将检测探针的另一端与预放大核酸的5’端碱基序列和3’端碱基序列结合，预放大核酸的第一互补序列和第二互补序列配对结合；

第三杂交步骤：将标记探针结合于预放大核酸的重复序列；或将放大核酸结合于预放大核酸的重复序列，然后将标记探针结合于放大核酸。

10.如权利要求9所述的预放大核酸的应用，其特征在于，第一杂交步骤为：将经固定的目标核酸和检测探针在6×SSC、25-50wt%甲酰胺、50mg/uL肝素、1mg/mL tRNA、0.1-0.5wt%SDS的条件下，于38-45℃反应1-16h；第二杂交步骤为：加入预放大核酸在5×SSC、25-50wt%甲酰胺、0.1-0.5wt%SDS的条件下，于38-45℃反应1-2h。