[发明专利]一种脑脊液类器官的培养基及其培养方法

说明书

本发明涉及一种脑脊液类器官的培养基及其培养方法，所述培养基包括基础培养基和分化培养基，所述基础培养基含有：DMEM/F12培养液，1×Glutamax，HEPES缓冲液，抗生素antibiotics，生长因子等；所述分化培养基为含有DMEM/F12，Neurobasal，B27supplement，2‑mercaptoethanol，insulin，Glutamax和MEM‑NEAA。本发明的培养方法是基于物理重力力学膜过滤法对待收集样本进行捕获，最大程度的保证了截留细胞的无损，且未进行任何标记，实现截留细胞的抗原表位的完整性和细胞的活性；该方法基于基质胶支架进行3D培养，能够更好的维持脑脊液三维的生长环境。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种脑脊液类器官的培养基及其培养方法。

背景技术

软脑膜转移(leptomeningeal metastasis,LM)是晚期非小细胞肺癌的并发症之一。软脑膜转移的诊断和检测具有挑战性，LM反应的三个基本要素：标准化的神经学检查、脑脊液细胞学或流失细胞术以及放射学评估检查。一项神经肿瘤学反应评估工作组共识建议：所有等级参加临床试验的患者接受脑脊液分析(所有癌症的细胞学检查，血液病的流式细胞术分析)、完全增强的神经轴MRI，以及在计划的脑脊液内治疗的情况下，进行放射性同位素脑脊液血流研究。但是，目前还没有治疗软脑膜转移(LM)的标准指南。但在软脑膜转移治疗的几个关键方面已经取得了实质性的进展，包括改善了基因图谱的特征，建立了临床相关的动物模型，改进了细胞学和基因分型分析的脑脊液液体活检，以及开发了更具中枢神经系统渗透性的治疗药物。

但是从脑瘤患者身上获取组织标本的挑战限制了诊断和分子特征，并阻碍了更好的治疗方法的发展。液体活检收集和分析体液中的肿瘤成分，在原发性和继发性脑肿瘤的治疗中，液体活检将作为肿瘤组织替代物的研究越来越受到人们的关注。中枢神经系统CNS恶性肿瘤研究相关的主要体液包括血液和脑脊液。虽然血液采集可能更直接，但脑脊液提供了许多优势。此外，CNS肿瘤来源的CTCs(脊液循环肿瘤细胞)在外周血中的数量较脑脊液中的数量低得多。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种培养基及其培养方法，是基于基质胶支架进行3D培养，能够更好的维持脑脊液三维的生长环境。

本发明的目的是提供一种脑脊液类器官的培养基。

本发明的另一目的是提供脑脊循环肿瘤细胞的培养方法。

根据本发明的具体实施方式脑脊液类器官的培养基，所述培养基包括基础培养基和分化培养基，所述基础培养基含有：DMEM/F12培养液，1×Glutamax， HEPES缓冲液，抗生素antibiotics，生长因子B27 supplement，生长因子EGF，生长因子FGF-10，生长因子IGF1，抗生素primocin，抑制剂SB431542，MEM-NEAA 和Heparin50；

所述分化培养基为含有DMEM/F12，Neurobasal，B27 supplement， 2-mercaptoethanol，insulin，Glutamax和MEM-NEAA。

根据本发明的具体实施方式的培养基，进一步的，所述抗生素antibiotics 包括青霉素和链霉素。

根据本发明的具体实施方式的培养基，进一步的，所述基础培养基为： DMEM/F12培养液中添加1％1×Glutamax，10mM HEPES缓冲液，100U/ml青霉素，0.1mg/ml链霉素，1.5％生长因子B27 supplement，1％生长因子N2 supplement，50ng/ml生长因子EGF，100ng/ml生长因子FGF-10，1μg/ml 生长因子IGF1，0.2％的抗生素primocin，10uM抑制剂SB431542，1％MEM-NEAA 和1ug/ml Heparin50；