[发明专利]广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法

说明书

本发明涉及药材检测技术领域，公开了广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，包括以下步骤：(1)、制备trnL‑trnF片段的标准品，通过荧光定量PCR方法进行各稀释浓度标准品的C_q值的测定，建立trnL‑trnF DNA片段的拷贝数对数值与相应C_q值的标准曲线；(2)、提取不同贮存年限广陈皮的基因组DNA作为模板，通过荧光定量PCR方法测定DNA模板中trnL‑trnFDNA片段的C_q值，将不同贮藏年限样品得到的C_q值代入到步骤(1)的标准曲线，计算出拷贝数对数值；(3)、将不同贮藏年限广陈皮中trnL‑trnF片段所得的拷贝数对数值与贮藏年限进行线性回归分析，建立基于DNA片段拷贝数判断不同贮藏年限的广陈皮的变化曲线。本发明能够鉴定广陈皮的贮藏年限，为广陈皮优质优价提供依据和保障。

技术领域

本发明涉及药材检测技术领域，具体涉及广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法。

背景技术

广陈皮为我国著名道地药材，来源于茶枝柑Citrus reticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮，主产于广东新会，兼具药食两用特色，在市场中占据重要地位。

陈皮自古有“陈久者良”一说，至少需要贮藏三年以上才可入药，贮藏年份越长的广陈皮价格越高。据报道和调查，时下贮藏3～5年的广陈皮，价格一般为800元/千克；10年的约为1600元/千克，20年的约为16000元/千克，而25年的是24000元/千克，30年的则达68000元/千克。50年左右的广陈皮，一般来说不少于20万元/千克。因此，市场上常有以其它柑橘类的果皮冒充广陈皮、夸大广陈皮晒制年份，以贮藏年份较短的广陈皮冒充高年份陈皮出售的现象出现。

目前，广陈皮贮藏年限的判断主要是根据其化学成分的变化规律与贮藏年限的关系进行探讨，例如FTIR、GC－MS等分析方法；此外，还有研究者利用分光测色仪研究广陈皮颜色特征与贮藏年限之间的相关性判断久贮中药的贮藏时间。上述研究对新会陈皮年份鉴别有参考意义，但研究样本少，专属性欠佳，存在不可控性，未能形成实际应用。

生物材料在贮藏过程中，其中的DNA将逐步降解，其中的某些DNA片段的拷贝数会逐渐减少，与材料贮藏年份之间存在有规律的量－时曲线。而广陈皮贮藏环境比较稳定且其规范的陈化方式，降解曲线应较为平滑，出现剧烈下降的可能性低。鉴于此，本发明提出用荧光定量PCR的方法对不同贮藏年限广陈皮中拷贝数表现差异的片段进行测定，提供一种利用分子生物学技术，明确的、可靠的鉴定广陈皮贮藏年份的客观方法。

发明内容

为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的是提供一种利用分子生物学技术，明确的、可靠的鉴定广陈皮贮藏年份的客观方法。采用荧光定量PCR的方法对不同贮藏年限广陈皮中trnL-trnF片段进行拷贝数的测定，其拷贝数的对数值与贮藏年限存在显著相关性，相关系数高达0.9748。这种方法可为广陈皮优质优价提供依据和保障，切实保护消费者权益；亦可为其它中药材贮藏时间的确定提供借鉴。

本发明的技术方案是：

本发明提供的广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，所述方法包括以下步骤：

(1)、制备trnL-trnF片段的标准品，通过荧光定量PCR方法进行各稀释浓度标准品的C_q值的测定，建立trnL-trnF DNA片段的拷贝数对数与相应C_q值的标准曲线；

(2)、提取不同贮存年限广陈皮的基因组DNA作为模板，通过荧光定量PCR方法测定DNA模板中trnL-trnFDNA片段的C_q值，将不同贮藏年限样品得到的C_q值代入到步骤(1)的标准曲线，计算出拷贝数对数值；

(3)、将不同贮藏年限广陈皮中trnL-trnF片段所得的拷贝数对数值与贮藏年限进行线性回归分析，建立基于DNA片段拷贝数判断不同贮藏年限的广陈皮的变化曲线。