[发明专利]广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法

权利要求书

1.广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)、制备trnL-trnF片段标准品，通过荧光定量PCR方法进行各稀释浓度标准品的C_q值的测定，建立trnL-trnF DNA片段的拷贝数对数与相应C_q值的标准曲线；

所述trnL-trnF DNA片段的引物序列为：

CTR02-F：CTCTTATCACAAGCCGTATGGTCTATACGATATATGTAGA；

CTR02-R：TATGAGCAATAATATGGATTGGGAATCATTAAAACG；

(2)、提取不同贮藏年限广陈皮的基因组DNA作为模板，通过荧光定量PCR方法测定DNA模板中trnL-trnF片段的C_q值，将不同贮藏年限样品得到的C_q值代入到步骤(1)的标准曲线，计算出拷贝数对数值；

(3)、将不同贮藏年限广陈皮中trnL-trnF片段所得的拷贝数对数值与贮藏年限进行线性回归分析，建立基于DNA片段拷贝数判断不同贮藏年限的广陈皮的相关曲线；

所述不同贮藏年限的广陈皮的贮藏时间为1、2、3、4、5、8、12年。

2.根据权利要求1所述的广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，其特征在于，trnL-trnF片段标准品为基于扩增子标准品或基于质粒标准品。

3.根据权利要求1所述的广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，其特征在于，所述荧光定量PCR反应的扩增体系为：DNA模板2μL；上下游引物各0.6μL；Takara TBGreen Premix Ex TaqⅡ10μL；去离子水6.8μL，反应总体积为20μL。

4.根据权利要求1所述的广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，其特征在于，qPCR扩增程序为：95℃预变性10min；95℃变性15s，59℃退火1min，共40个循环，在每个循环延伸结束时采集荧光信号。

5.根据权利要求1所述的广陈皮贮藏年限的分子鉴定方法，其特征在于，贮藏年限1、2、3、4、5、8、12年广陈皮拷贝数的对数值与贮藏年限进行线性回归分析是以贮藏年限为横坐标，lg拷贝数为纵坐标或以lg拷贝数为横坐标，贮藏年限为纵坐标最终生成相关曲线。