[发明专利]柑桔黄龙病菌分子荧光RAA检测引物探针组、试剂盒及方法有效
| 申请号： | 202110358212.7 | 申请日： | 2021-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN113493846B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 滕丽琼;李春燕;邱英华;郑苏华 | 申请（专利权）人： | 南宁众册生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向庆宁;曹小燕 |
| 地址： | 530000 广西壮族自治区南宁市大学西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 柑桔 黄龙 病菌 分子 荧光 raa 检测 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1.一种柑桔黄龙病菌分子荧光RAA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下的用于扩增靶基因质粒序列SEQ ID NO.8的引物探针组，所述引物探针组的正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，反向引物核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，特异性荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其中，所述特异性荧光探针的序列中间标记有荧光报告基团、荧光淬灭基团以及四氢呋喃，3’端标记有C3 Spacer；所述特异性荧光探针的荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas Red或LC RED460中的一种，荧光淬灭基因选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1或Tamra中的一种。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RAA反应混合液、柑桔黄龙病菌核酸阳性参考品和ddH2O。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述柑桔黄龙病菌核酸阳性参考品为柑桔黄龙病菌Las基因部分序列的阳性质粒。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述含有柑桔黄龙病菌Las基因的阳性质粒的部分序列如SEQ ID NO.8所示。
5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述RAA反应混合液包括120ng/μLSSB蛋白、100ng/μL recA重组酶蛋白、40ng/μL Rad51、30ng/μL BsμDNA聚合酶、1mmol/LdNTP、400nmol/L引物混合液、100nmol/L探针混合液、280mmol/L MgAC、20％PEG。
6.一种柑桔黄龙病菌分子荧光RAA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：提取待测样本的DNA，以待测样本的DNA为模板，采用如权利要求1～5任一项所述的检测试剂盒进行实时荧光RAA反应，根据实时荧光扩增曲线分析待测样本，确定待测样本中是否存在柑桔黄龙病菌。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述实时荧光RAA反应程序为：39℃，1min；39℃，30s，采集荧光，共计40个循环。
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