[发明专利]一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的引物组、方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种利用SSR标记快速鉴定种苗期马蹄莲类型的引物组、方法、试剂盒及其应用。所述引物组包含引物对Zah27、Zah89和Zah102中的至少一种；所述引物对Zah27碱基序列如序列表中SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；所述引物对Zah89碱基序列如序列表中SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；所述引物对Zah102碱基序列如序列表中SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。本发明的方法具有操作简单、检测效率高等优点，填补了当前马蹄莲属内组间种苗早期鉴定技术缺失的空白，能够有效打击假冒种苗的销售和传播，保护马蹄莲种苗购买者的合法权益。

技术领域

本发明属于分子标记技术，具体地，涉及一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲属白色组和彩色组种苗的引物组、方法及试剂和试剂盒。

背景技术

马蹄莲(Zantedeschia)为原产于南非的天南星科(Araceae)，是多年生草本植物，全属共7种2亚种，按其生活习性和特征分为白色和彩色两个组。白色组的植株茎叶在冬季不落叶，花期从晚冬到晚春，耐寒性和抗病性强，适应范围广；但常见的仅一种，其佛焰苞花色单一仅为白色，即Z.aethiopica。而彩色组包括Z.elliottianna，Z.rehmannii，Z.albomaculata，Z.jucunda， Z.pentlandii等多个种或亚种；夏季开花，冬季落叶，经低温休眠花芽分化后可在第二年继续生长开花；与白色组相比，虽然彩色组耐寒耐热性和抗病性较差，但因为它们更容易产生组内种间园艺杂交种(Z.hybrida)，变异类型更多，佛焰苞花色更丰富艳丽，具体包含红、黄、粉、橙、紫多个色系，所以更受市场欢迎。目前国际国内市场上流行的商业马蹄莲品种主要来自于彩色组，据不完全统计，彩色组品种注册数量已超过300个，较高的观赏价值和广阔的市场前景俨然使其跻身于高档球根花卉之列。

购买利用组织培养技术生产的大批量脱毒种苗，是目前国内外栽培生产公司或机构实现马蹄莲商业种球快速供应的一个主要途径。这主要是因为采用组培技术工厂化所生产的马蹄莲种苗，其植株长势强，开花整齐，而且产花量高，具有能保持原品种的性状、繁殖速度快和便于管理等优点。但也存在一个重要问题，即组织培养过程中的白色组和彩色组马蹄莲的种质材料，在叶片形态上是无法区分和辨别的，而两者最有效的区分方式为块茎形态和佛焰苞颜色，但至少在组培苗移栽生长2年后才能观察到。因为白色组马蹄莲的市场价值相对比较低廉，加上材料获取容易且组培快繁系数大等优势，所以存在不良商家或个人故意用其冒充彩色组马蹄莲，从而达到以次充好混淆两者的目的，极大的增加了马蹄莲栽培生产者的种植商业风险。因此，如何实现白色和彩色组马蹄莲苗期的早期鉴定就显得格外重要。

白色组和彩色组马蹄莲之间存在着严重的生殖隔离，两者通过杂交所获得的后代因为核质基因组不兼容，会导致的胚乳败育、质体发育不良及白化苗等问题，使其难以成活。进一步利用流式细胞仪对两者代表种的基因组大小进行估测，发现它们存在明显的区别，白色组马蹄莲Z.aethiopica和彩色组马蹄莲Z.elliottiana的核DNA含量分别约为3.72±0.10pg和1.17±0.50pg (DNA/2C)，基因组大小各相当于3.64Gbp和1.15Gbp。考虑到两者基因组差异较大，若能寻找到两者共有的且具有差异的基因组来源的核酸序列，并开发出重现性好和特异性强的分子标记，比如一般由2～6个核苷酸为重复单位组成的串联重复SSR标记，有助于解决白色组和彩色组马蹄莲的早期检测问题，也势必将对马蹄莲属两个组未来新品种的选育和保护起到重要辅助作用。

发明内容

为解决当前白色组和彩色组马蹄莲苗期种质鉴定方法不足的问题，本发明目的在于提供了一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的引物组、方法、试剂盒及其应用。基于马蹄莲属白色组和彩色组之间多个种(品种)共有转录组拼接序列所开发的SSR引物组及鉴定方法，可有效满足当前市场对两个马蹄莲组间种苗的早期商业鉴定要求。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：