[发明专利]一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的引物组、方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的引物组，所述鉴定马蹄莲种苗类型是指在马蹄莲种苗期区分其属于白色组马蹄莲或彩色组马蹄莲，其特征在于，所述引物组包含引物对Zah27、Zah89和Zah102中的至少一种；

所述引物对Zah27的正向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，反向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：2所示；

所述引物对Zah89的正向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：3所示，反向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：4所示；

所述引物对Zah102的正向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：5所示，反向引物的碱基序列如序列表中SEQ ID NO：6所示。

2.一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的方法，所述鉴定马蹄莲种苗类型是指在马蹄莲种苗期区分马蹄莲来源为白色组或彩色组，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

S1、提取待测马蹄莲的基因组DNA；

S2、以待测马蹄莲的基因组DNA为模板，用权利要求1所述的引物组中的任一或多种引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

S3、检测所述PCR扩增产物，并根据所述PCR扩增产物的带型进行鉴定，以确定所述待测马蹄莲类型是来源于白色组或彩色组；

所述鉴定按照如下方法进行：

采用引物对Zah27进行PCR扩增时，经电泳后，当PCR扩增产物是分子量大小为120bp的条带和/或110bp的条带时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为130bp时，待测马蹄莲来源于彩色组；

采用引物对Zah89进行PCR扩增时，经电泳后，当PCR扩增产物是分子量大小为147bp的条带和/或153bp的条带时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为160bp时，待测马蹄莲来源于彩色组；

采用引物对Zah102进行PCR扩增时，当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为190bp时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为177bp时，待测马蹄莲来源于彩色组。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系按12.5μL计为：10ng/μL所述模板 2.0μL，10×Buffer 1.25μL，2.5mM dNTPs 0.25μL，10μM正向引物0.4μL，10μM反向引物0.4μL，Taq DNA聚合酶0.2μL，ddH₂O 8.0μL。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；94℃变性45s，52-58℃退火40s，72℃延伸60s，共30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。

5.一种利用SSR标记快速鉴定马蹄莲种苗类型的试剂盒，所述鉴定马蹄莲种苗类型是指在马蹄莲种苗期区分马蹄莲来源为白色组或彩色组，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物组。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组中，正向引物和反向引物的摩尔比为1:1。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA聚合酶和/或dNTPs。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液。

9.权利要求1所述的引物组或权利要求2-4任一项所述的方法或者所述权利要求5-8任一项所述的试剂盒在马蹄莲种苗类型鉴定方面的应用；

所述类型鉴定是指在马蹄莲种苗期区分马蹄莲来源于白色组或彩色组；

所述鉴定按照如下方法进行：

采用引物对Zah27进行PCR扩增时，经电泳后，当PCR扩增产物是分子量大小为120bp的条带和/或110bp的条带时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为130bp时，待测马蹄莲来源于彩色组；

采用引物对Zah89进行PCR扩增时，经电泳后，当PCR扩增产物是分子量大小为147bp的条带和/或153bp的条带时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为160bp时，待测马蹄莲来源于彩色组；

采用引物对Zah102进行PCR扩增时，当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为190bp时，待测马蹄莲来源于白色组；当PCR扩增产物是一条电泳条带且分子量大小为177bp时，待测马蹄莲来源于彩色组。