[发明专利]一种提高谷氨酸棒杆菌合成5-氨基乙酰丙酸产量的方法在审
| 申请号： | 202110243463.0 | 申请日： | 2021-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN112980758A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;王丽君;杨套伟;徐美娟;张显;邵明龙 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N9/02;C12N9/10;C12N15/77;C07K14/34;C12P13/00;C12R1/15 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 谷氨酸 杆菌 合成 氨基 乙酰 丙酸 产量 方法 | ||
1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为宿主，敲除了α-酮戊二酸抑制蛋白odhI和琥珀酸脱氢酶sdhA，并且过表达了5-氨基乙酰丙酸合成酶hemA。
2.如权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，以pK18mobsacB质粒或pXMJ19质粒为表达载体，过表达了5-氨基乙酰丙酸合成酶hemA。
3.如权利要求1或2所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述α-酮戊二酸抑制蛋白odhI的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述琥珀酸脱氢酶sdhA的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示；所述5-氨基乙酰丙酸合成酶hemA的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.构建权利要求1-3任一所述重组谷氨酸棒杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建宿主细胞：敲除谷氨酸棒杆菌13032中编码α-酮戊二酸抑制蛋白基因odhI和编码琥珀酸脱氢酶的基因sdhA，构建宿主细胞C.glutamicum 13032△odhI△sdhA；
(2)构建重组质粒：将氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示5-氨基乙酰丙酸合成酶hemA与pXMJ19质粒连接，得到重组质粒pXMJ19-hemA；
(3)将重组质粒pXMJ19-hemA转入宿主细胞C.glutamicum 13032△odhI△sdhA，构建得到重组谷氨酸棒杆菌。
5.一种生产5-氨基乙酰丙酸的方法，其特征在于，应用权利要求1～3任一所述的重组谷氨酸棒杆菌，以葡萄糖为原料，发酵生产5-氨基乙酰丙酸。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述种子液按8～12％的比例接种至发酵培养基中，进行发酵培养。
7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括：葡萄糖125-140g/L，硫酸铵20-25g/L，磷酸二氢钾2-3g/L，七水合硫酸镁0.5-1g/L，玉米浆30-50g/L，七水合硫酸亚铁0.02-0.05g/L，一水合硫酸锰0.02-0.05g/L，尿素1-2g/L。
8.如权利要求5-7任一所述的方法，其特征在于，将重组谷氨酸棒杆菌添加至种子培养基中，在28-32℃、180-200rpm条件下培养20-24h，得到种子液。
9.如权利要求5-8任一所述的方法，其特征在于，将种子液接种至发酵培养基中，在28-32℃、200-220rpm条件下培养84-96h。
10.权利要求1-3任一所述的重组谷氨酸棒杆菌，或权利要求5-9任一所述的方法在制备含有5-氨基乙酰丙酸产品中的应用。
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