[发明专利]具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌工程菌有效
| 申请号： | 202110228234.1 | 申请日： | 2021-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN112961816B | 公开（公告）日： | 2022-11-25 |
| 发明（设计）人： | 骆健美;王敏;申雁冰;曹书婷;朱文成;李芳 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/60;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/31;C12P33/02;C12R1/06 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 赵瑶瑶 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 具有 c1 脱氢 反应 能力 简单 杆菌 工程 | ||
1.一株具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌基因工程菌，其特征在于：基因工程菌是以简单节杆菌(
2.权利要求1所述的一株具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌基因工程菌的构建方法，具体如下：
(1)以简单节杆菌CPCC 140451基因组为模板，通过PCR扩增得到该菌株中的调控蛋白编码基因，基因为SEQ ID No.2任一所示的基因；
(2)利用基因工程的手段将上述调控蛋白编码基因分别连接到大肠杆菌-节杆菌穿梭质粒pART2A的启动子后，化转到大肠杆菌DH5α中进行复制；
(3)提取重组质粒，分别电转化到简单节杆菌CPCC 140451中进行表达。
3.一株具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是以简单节杆菌CPCC 140451为宿主细胞，同时表达序列表SEQ ID No.2任一所示的调控蛋白编码基因和SEQ ID No.4-6任一所示3-甾酮-Δ1-脱氢酶编码基因所得。
4.根据权利要求3所述的具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌基因工程菌，其特征在于：以pART2A质粒为表达载体，该质粒是在pART2质粒野生型启动子hdnOp的5’端引入限制性酶切位点
5.一种催化醋酸可的松发生C1,2脱氢反应方法，其特征在于：采用权利要求1或3所述的具有甾体C1,2脱氢反应能力的简单节杆菌基因工程菌进行底物醋酸可的松转化。
6.根据权利要求5所述的催化醋酸可的松发生C1,2脱氢反应方法，其特征在于：转化体系中底物醋酸可的松的浓度为10-60 g/L。
7.根据权利要求5所述的催化醋酸可的松发生C1,2脱氢反应方法，其特征在于：转化体系中的乙醇浓度为4-15%。
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