[发明专利]一种蜂胶佐剂组合物、及其制备方法以及应用

说明书

本发明涉及一种制备蜂胶佐剂组合物的方法，该佐剂组合物通过将各组分经过高能量源乳化制备成粒径为1nm‑550nm的颗粒；该各组分包括蜂胶提取物乙醇浸出液、胆固醇乙醇溶液；该高能量源为微流化器、挤出机、超声发生器、高剪切混合器或均质机产生。该制备方法使得制备的蜂胶佐剂组合物和疫苗保持长时间的稳定。本发明还提供制备的蜂胶佐剂组合物，其各组分之间产生协同增效作用，能增强免疫刺激效果。

技术领域

本发明涉及一种蜂胶佐剂组合物，及其制备方法以及应用，属于兽药领域。

背景技术

蜂胶是由蜜蜂(Apis mellifera)的工蜂采集杨树、柳树、松树等植物的幼芽等同自身的消化腺和蜡腺等分泌物进行混合之后形成的一种具有芳香气味的胶状固体物。蜂胶含有有黄酮、香豆索、挥发油等化合物，蜂胶作为佐剂已经在多个禽用细菌疫苗以及猪用细菌疫苗中应用，具有无残留和副反应小的特点。蜂胶佐剂的免疫机理尚不清楚，但普遍认为是靠各种成份协同其作用。

现有技术的蜂胶佐剂，例如，CN 104984336公开了一种猪链球菌病二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法；CN 105194664 A公开了一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法。均采用蜂胶的乙醇浸出液作为佐剂，其制备方法为：蜂胶在低温下贮存，使用时先将蜂胶置于-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按1:4的比例加入95％乙醇，在37℃浸提48-72h，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液。疫苗的制备采用抗原液中加入蜂胶乙醇浸出液，2000rpm搅拌15～20分钟，使其充分混合乳化。

现有技术还公开了纳米蜂胶，其通过表面活性剂例如泊洛沙姆、吐温等实现了作为食品、保健品的应用，而作为佐剂使用则效果微弱。

此外，现有使用乙醇提取的蜂胶佐剂直接与抗原乳化过程中苗放置产生沉淀，沉淀聚集在疫苗瓶底，使用需要强力摇匀才可使用。

因此，亟需一种能制备稳定、具有良好的免疫刺激作用的蜂胶佐剂的制备方法，同时提供具有稳定、良好的免疫刺激作用的蜂胶佐剂。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供一种制备蜂胶佐剂组合物的方法，其中，所述佐剂组合物通过将各组分经过高能量源乳化制备成粒径为1nm-550nm的颗粒；所述各组分包括蜂胶提取物乙醇浸出液、胆固醇乙醇溶液；所述高能量源为微流化器、挤出机、超声发生器、高剪切混合器或均质机产生。

本发明的制备方法，保证了佐剂中仅含有蜂胶提取物乙醇浸出液、胆固醇乙醇溶液组分的条件下，也能使得佐剂组合物和制备的疫苗保持长时间的稳定。

作为本发明的一种实施方式，本发明的制备蜂胶佐剂组合物的方法中，所述高剪切混合器为silverson混合器。

作为本发明的一种实施方式，本发明的制备蜂胶佐剂组合物的方法中，所述蜂胶提取物乙醇浸出液制备方法为将蜂胶置-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机粉碎所述冷冻蜂胶，过筛，按1:4的比例在所述粉碎蜂胶中加入95％乙醇，然后在37℃浸提48-72h，冷却、过滤得到所述蜂胶提取物乙醇浸出液；所述胆固醇乙醇溶液为将胆固醇溶解在95％乙醇中，配制成浓度20毫克/毫升的溶液。

作为本发明的一种实施方式，本发明的制备蜂胶佐剂组合物的方法中，所述各组分还包括DEAE葡聚糖溶液、Quil A溶液。

本发明的蜂胶佐剂组合物含有的蜂胶和DEAE葡聚糖两者之间产生了协同作用，使得其刺激免疫反应的活性增强，同时，本发明佐剂组合物中加入的Quil A、胆固醇进一步显著增强了免疫效果。。

作为本发明的一种优选实施方式，本发明的制备蜂胶佐剂组合物的方法中，所述DEAE葡聚糖溶液浓度为30％w/v；所述Quil A溶液浓度为50毫克/毫升。