[发明专利]合成α-熊果苷的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种合成α-熊果苷的枯草芽孢杆菌，其特征在于，其是在枯草芽孢杆菌宿主中整合表达蔗糖磷酸化酶，并采用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的RBS调控蔗糖磷酸化酶基因表达；

所述的蔗糖磷酸化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的整合表达是在枯草芽孢杆菌宿主的yqhB位点、yitR位点和ymzB位点中的一个或多个位点整合包含蔗糖磷酸化酶基因的表达框；

所述的枯草芽孢杆菌宿主为枯草芽孢杆菌WB800ΔnprB-ΔaprE-Δepr-Δbpr-ΔnprE-Δmpr-Δvpr-ΔwprA。

2.一种权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、构建表达框：将蔗糖磷酸化酶基因连接到表达载体上，并插入SEQ ID NO. 1所述的RBS序列；

S2、整合表达：将S1步骤构建的表达框整合至枯草芽孢杆菌宿主中，消除抗性得到所述的枯草芽孢杆菌；

所述的整合是将所述的表达框整合至枯草芽孢杆菌宿主的yqhB位点、yitR位点和ymzB位点中的一个或多个位点。

3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在全细胞催化合成α-熊果苷中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的应用是将所述的枯草芽孢杆菌作为催化剂，在25-35℃催化蔗糖和对苯二酚反应生产α-熊果苷。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，催化反应的反应液包括OD₆₀₀=30-60的枯草芽孢杆菌细胞，300-450 g/L蔗糖，50-70 g/L 对苯二酚。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌细胞是通过将所述的枯草芽孢杆菌接种至TB培养基中35-38℃培养10-15 h得到。