[发明专利]重组微生物及其用途、制备莽草酸和奥司他韦的方法

权利要求书

1.一种用于生产莽草酸的重组微生物，其特征在于，所述重组微生物的PTS系统和莽草酸激酶被下调，并且所述重组微生物的3-脱氢奎尼酸合成酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶、莽草酸脱氢酶、转酮醇酶I、磷酸烯醇式丙酮酸合成酶被上调，

其中，所述重组微生物进一步携带编码下列至少之一的外源核酸：

(A)外源肌醇转运蛋白或其功能类似物；和

(B)外源葡萄糖转运蛋白或其功能类似物，

编码所述外源肌醇转运蛋白的外源核酸为源自谷氨酸棒杆菌的iolT1；

编码所述葡萄糖转运蛋白的外源核酸为源自运动发酵单胞菌的glf和glk，

所述外源核酸分别独立地插入至所述莽草酸激酶和所述PTS系统至少之一对应的位点中，并且阻断所述莽草酸激酶和所述PTS系统至少之一的表达，

所述重组微生物为大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，编码所述莽草酸激酶的基因包括aroL和aroK，所述PTS系统包括ptsHIcrr操纵子。

3.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，所述外源核酸可操作地与启动子相连，所述启动子包括选自大肠杆菌来源启动子、T7、tac、trc、lac和trp启动子的至少之一。

4.根据权利要求3所述的重组微生物，其特征在于，所述启动子为组成型T7启动子0。

5.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，所述重组微生物的基因组中整合有依次串联的第一组成型T7启动子、iolT1、第二组成型T7启动子、glf和glk。

6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体整合有依次串联的第一组成型T7启动子、iolT1、第二组成型T7启动子、glf和glk。

7.权利要求1～5任一项所述的重组微生物或权利要求6所述的表达载体在制备莽草酸中的用途。

8.一种制备莽草酸的方法，其特征在于，包括：

对权利要求1～5任一项所述的重组微生物进行液体培养；和

从所述液体培养的培养产物中分离莽草酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述液体培养包括：

菌体生长阶段，所述菌体生长阶段是在约37摄氏度下进行10～30小时；

莽草酸合成阶段，所述莽草酸合成阶段是在约28～33摄氏度下进行的。

10.一种制备奥司他韦的方法，其特征在于，包括：

按照权利要求8或9所述的方法，制备莽草酸；和

利用所述莽草酸作为中间体，合成奥司他韦。