[发明专利]乙型肝炎病毒pgRNA芯片数字PCR绝对定量检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种引物探针组合物在制备利用数字PCR检测乙型肝炎病毒pgRNA的试剂或试剂盒中的应用；

所述引物探针组合物由引物HBV-F、引物HBV-R和探针HBV-P组成；

所述引物HBV-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物HBV-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探针HBV-P，一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团，其核苷酸序列如下(a5)或(a6)：

(a5)如序列表的序列3所示；

(a6)如将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加所示。

2.一种引物探针组合物，由引物HBV-F、引物HBV-R和探针HBV-P组成；

所述引物HBV-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物HBV-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述探针HBV-P，一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团，其核苷酸序列为如下(a5)或(a6)：

(a5)如序列表的序列3所示；

(a6)如将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加所示。

3.权利要求2所述引物探针组合物的应用，为如下(b1)、(b2)、(b3)、(b4)、(b5)或(b6)或(b7)或(b8)：

(b1)鉴定乙型肝炎病毒；

(b2)制备用于鉴定乙型肝炎病毒的试剂盒；

(b3)检测待测样本是否含有乙型肝炎病毒pgRNA；

(b4)制备用于检测待测样本是否含有乙型肝炎病毒pgRNA的试剂盒；

(b5)检测待测样本中乙型肝炎病毒pgRNA的载量；

(b6)制备用于检测待测样本中乙型肝炎病毒pgRNA载量的试剂盒；

(7b)预测乙肝复发率；

(8b)制备用于预测乙肝复发率的产品。

4.一种试剂盒，包括权利要求2所述引物探针组合物；所述试剂盒的功能为如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)：

(c1)鉴定乙型肝炎病毒；

(c2)检测待测样本是否含有乙型肝炎病毒pgRNA；

(c3)检测待测样本中乙型肝炎病毒pgRNA的载量；

(c4)预测乙肝复发率。

5.一种检测待测样本是否含有乙型肝炎病毒pgRNA的方法，包括如下步骤：以待测样本的cDNA为模板，采用权利要求2所述引物探针组合物进行数字PCR；如果检测结果为阳性，所述待测样本含有乙型肝炎病毒pgRNA；如果检测结果为阴性，所述待测样本不含有乙型肝炎病毒pgRNA。

6.一种检测待测样本中乙型肝炎病毒pgRNA的载量的方法，包括如下步骤：以待测样本的cDNA为模板，采用权利要求2所述引物探针组合物进行数字PCR；根据乙型肝炎病毒pgRNA阳性荧光点得到待测样本中乙型肝炎病毒pgRNA的载量。

7.一种用于通过数字PCR检测乙型肝炎病毒pgRNA的预混液，其中含有权利要求2所述引物探针组合物中所述的引物HBV-F、引物HBV-R、探针HBV-P和QuantStudio^TM3D DigitalPCR Master Mix；所述预混液中，引物HBV-F的浓度为0.53μM，引物HBV-R的浓度为0.53μM，探针HBV-P的浓度为1.05μM。