[发明专利]一种全新基因组合模式在小鼠中建立胰腺癌的方法

说明书

本发明提供了一种全新的胰腺癌小鼠模型构建方法。具体地，本发明提供了一种非人哺乳动物的胰腺癌动物模型的制备方法，所述方法包括步骤：提供一非人哺乳动物，向所述非人哺乳动物中引入KRAS^G12D突变，并且敲降所述非人哺乳动物体内的Tp53、Cdkn2a和Smad4的表达。实验结果表明，所诱发的胰腺癌具有成瘤时间短、成瘤率高、具有人胰腺导管腺癌病理特征等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全新基因组合模式在小鼠中建立胰腺癌的方法。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的第二大疾病，每年约有九百万人死于肿瘤。胰腺癌被称为“癌中之王”，其中胰腺导管腺癌占胰腺恶性肿瘤的85％，五年生存率低于5％严重威胁人类健康。因此胰腺癌的早期诊断及探究其致病机理成为胰腺癌研究的重中之重。而适宜的动物模型是解决上述问题的关键。

现有的胰腺癌模型主要集中于啮齿类动物，主要包括：化学致癌剂诱导模型、裸鼠移植瘤模型、基因工程鼠模型等。前两者存在诱发周期长、诱发率低、无法模拟肿瘤微环境等缺点。胰腺癌常用基因工程小鼠模型主要有KC模型(Kras^G12D/Pdx1-Cre)和KPC模型(LSL-Kras^G12D/LSL-tp53^R172H；Pdx1-Cre)。

然而，目前的这两种胰腺癌小鼠模型仍然存在一些缺点，其对于胰腺癌的研究效果并不令人满意。一方面，在这两种模型中Kras^G12D的表达和tp53的突变均开始于早期胚胎时期，而人类肿瘤多是成年后遗传变异累计造成的，因此并不相符。而且Kras诱导胰腺癌的能力随着年龄增长而逐渐下降，在成体中完全丧失；在成熟的腺泡细胞中Kras也不能诱导明显的肿瘤，甚至再加上Tp53或者Cdkn2a的失活也不能诱导肿瘤形成，除非在此基础上再沉默Cdkn2b才能诱发小鼠胰腺癌。另一方面，制备转基因工程鼠费时、费力，且得到同时携带2-3个基因修饰的小鼠需费时1-2年、期间饲养费用支出庞大。

因此，本领域迫切需要开发出一种操作方便、成瘤时间短、成瘤率高、肿瘤病理特征与人类更加相似的小鼠胰腺癌模型。

发明内容

本发明的目的就是提供一种操作方便、成瘤时间短、成瘤率高、肿瘤病理特征与人类更加相似的小鼠胰腺癌模型。

在本发明的第一方面，提供了一种非人哺乳动物的胰腺癌动物模型的制备方法，所述方法包括步骤：提供一非人哺乳动物，向所述非人哺乳动物中引入KRAS突变，并且敲降所述非人哺乳动物体内的Tp53、Cdkn2a和Smad4的表达。

在另一优选例中，所述方法包括步骤：

(a)获得一慢病毒，所述慢病毒中含有过表达KRAS突变体和敲降Tp53、Cdkn2a和Smad4表达的核苷酸序列；

(b)用所述慢病毒感染非人哺乳动物胰腺头部。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物为成年的啮齿动物或灵长目动物，较佳地包括：小鼠、大鼠、兔、猴。

在另一优选例中，所述非人哺乳动物为成年的小鼠。

在另一优选例中，所述的KRAS突变包括：将KRAS蛋白的第12位的氨基酸G突变为氨基酸D，所述的第12位是基于SEQ ID NO:1所示序列的第12位。

在另一优选例中，在步骤(a)中，所述的慢病毒中包括一外源核酸构建物，所述的核酸构建物包括以下元件：

(i)KRAS突变型基因序列及其启动子I；

(ii)靶向Tp53基因的shRNA序列及其启动子II；

(iii)靶向Cdkn2a基因的shRNA序列及其启动子III；和