[发明专利]LAMP引物组包含其的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其应用和检测方法

说明书

本发明提供了一种LAMP引物组包含其的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其应用和检测方法，涉及分子生物学技术领域。所述LAMP引物组包括上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3，其中上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID No.1～4所示。上述4条引物是由烟草靶斑病菌AG3融合群的ITS序列作为靶标分子而设计得到的。因此，上述4条引物对烟草靶斑病具有较高的特异性和敏感性，进而包括该LAMP引物组的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其检测方法，其能够实现烟草靶斑病的快速检测，具有灵敏度高、特异性好的优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种LAMP引物组包含其的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其应用和检测方法。

背景技术

烟草靶斑病由瓜亡革菌担孢子引起的一种重要的烟草叶部病害，其无性态为立枯丝核菌。病害早期容易与其它叶部病害如烟草赤星病等混淆，不易被发现，一旦流行便发展迅速，防止困难，造成重大损失。因此，建立一种烟草靶斑病快速检测方法对该病害早期防控非常重要。

目前对该病害的检测方法主要包括，病原菌分离和鉴定，以及普通的 PCR和荧光定量PCR鉴定。这些方法要么对专业要求比较高，且过程繁琐，耗时长，要么对仪器设备要求高，不能达到高效经济地检测要求。

因此，急需研究开发出一种敏感性强、特异性高、检测准确、操作简单快捷，检测设备要求低的烟草靶斑病检测方法，以避免在该病害早期与其它叶部病害如烟草赤星病等混淆问题，变得十分必要和紧迫。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种LAMP引物组以及包含该LAMP引物组的用于烟草靶斑病检测的试剂盒和检测方法，上述引物组是由烟草靶斑病菌的ITS序列及其它丝核菌不同融合群序列作为靶标分子而设计的，因此，上述LAMP引物组对烟草靶斑病具有较高的特异性和敏感性，进而包括该 LAMP引物组的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其检测方法能够实现烟草靶斑病的快速检测，具有灵敏度高、特异性好的优点。

为实现上述目的，本发明特提出如下技术方案：

本发明提供的一种LAMP引物组，所述LAMP引物组包括上游内引物 FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3，其中：

所述上游内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述下游内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述上游外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述下游外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

本发明提供的上述LAMP引物组在烟草靶斑病检测中的应用。

本发明提供的一种用于烟草靶斑病检测的试剂盒，所述试剂盒包括含有上述LAMP引物组的引物溶液。

进一步的，所述引物溶液中上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3的摩尔比为1～2μM：1～2μM：0.1～0.4μM： 0.1～0.4μM：0.2～0.5μM：0.2～0.5μM。

进一步的，所述试剂盒还包括LAMP反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、链置换DNA聚合酶以及与dsDNA具有结合能力的荧光染料中的任意一种或至少二种的组合。

进一步的，所述试剂盒的反应体系包括：

引物溶液、LAMP反应缓冲液、dNTPs、MgSO₄、链置换DNA聚合酶、 dsDNA具有结合能力的荧光染料和超纯水；