[发明专利]LAMP引物组包含其的用于烟草靶斑病检测的试剂盒及其应用和检测方法

权利要求书

1.一种LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3，其中：

所述上游内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述下游内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述上游外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述下游外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.如权利要求1所述的LAMP引物组在烟草靶斑病检测中的应用。

3.一种用于烟草靶斑病检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含有权利要求1所述LAMP引物组的引物溶液。

4.根据权利要求3所述的用于烟草靶斑病检测的试剂盒，其特征在于，所述引物溶液中上游内引物FIP、下游内引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3的摩尔比为1～2μM：1～2μM：0.1～0.4μM：0.1～0.4μM。

5.根据权利要求3所述的用于烟草靶斑病检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括LAMP反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、链置换DNA聚合酶以及与dsDNA具有结合能力的荧光染料中的任意一种或至少二种的组合。

6.根据权利要求3所述的用于烟草靶斑病检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系包括：

引物溶液、LAMP反应缓冲液、dNTPs、MgSO₄、链置换DNA聚合酶、与dsDNA具有结合能力的荧光染料和超纯水。

7.根据权利要求5或6所述的用于烟草靶斑病检测的试剂盒，其特征在于，所述与dsDNA具有结合能力的荧光染料为SYBR Green I。

8.一种烟草靶斑病的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

提供待测样品DNA提取物，然后使用权利要求3～7任一项所述的用于烟草靶斑病检测的试剂盒对待测样品DNA提取物进行LAMP扩增反应得到扩增产物，随后对扩增产物进行电泳或荧光检测，判断待测样品是否感染有烟草靶斑病。

9.根据权利要求8所述的烟草靶斑病的检测方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应包括以下步骤：

首先在60～66℃条件下扩增35～45min，随后在94～96℃条件下保持2～3min灭活链置换DNA聚合酶，得到扩增产物。