[发明专利]铁皮石斛叶生物碱的制备方法及其应用

权利要求书

1.铁皮石斛叶生物碱的制备方法，该方法包括将铁皮石斛叶经90~95%乙醇提取，回收溶剂，得到粗提物，粗提物分别通过石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇萃取，分别得石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇萃取部位，其中二氯甲烷萃取部位经硅胶柱层析用石油醚-丙酮，二氯甲烷-甲醇，以及甲醇洗脱，得到Fr. A、Fr. B、Fr. C、Fr. D、Fr. E、Fr. F和Fr.G七个部分，其中Fr. B经反相硅胶柱层析，甲醇-水梯度洗脱，得到Fr. B₁、Fr. B₂、Fr. B₃、Fr. B₄和Fr. B₅五个部分；Fr. B₂经凝胶柱层析用甲醇洗脱，用半制备高效液相色谱纯化得到川芎哚和β-咔啉；Fr. C经反相硅胶柱层析，甲醇-水梯度洗脱，再用半制备高效液相色谱纯化后得到1-羟甲基-β-咔啉；Fr. D经反相硅胶柱层析，甲醇-水梯度洗脱，再用半制备高效液相色谱纯化得到1-(β-咔啉-1-基)-3,4,5-三羟基-1-戊酮；Fr. E经反相硅胶柱层析，甲醇-水梯度洗脱，经LH-20凝胶柱层析用甲醇洗脱，再用半制备高效液相色谱纯化后得到4-(6-甲基吡嗪-2-基)-1,2,3-丁三醇。

2.铁皮石斛叶生物碱的制备方法，该方法包括下述步骤：

将铁皮石斛叶用90~95%乙醇提取，回收溶剂，得到粗提物，粗提物加入水水制备成混悬液，加入石油醚萃取，重复8次；萃取后的水相用6 M盐酸调节pH值为2~3，用乙酸乙酯萃取，重复5次；萃取后的水相用50%氢氧化钠水溶液调节pH值为9~10，用二氯甲烷萃取，重复5次；萃取后的水相用6 M盐酸调节pH值至7左右，用正丁醇萃取，重复5次，回收溶剂后，分别得到石油醚萃取部位，乙酸乙酯萃取部位，二氯甲烷萃取总生物碱部位，以及正丁醇萃取部位；

二氯甲烷萃取部位经硅胶柱层析用石油醚-丙酮（5:1，3:1，1:1），二氯甲烷-甲醇（1:1），以及甲醇洗脱，得到Fr. A、Fr. B、Fr. C、Fr. D、Fr. E、Fr. F和Fr. G七个部分；

Fr. B（石油醚-丙酮5:1洗脱部分）经C₁₈反相硅胶柱层析，甲醇-水（30:70→100:0）梯度洗脱，得到Fr. B₁、Fr. B₂、Fr. B₃、Fr. B₄和Fr. B₅五个部分；

Fr. B₂（30~50%甲醇洗脱部分）经LH-20凝胶柱层析用甲醇洗脱，用半制备高效液相色谱纯化得到川芎哚和β-咔啉；

Fr. C（石油醚-丙酮3:1洗脱部分）经C₁₈反相硅胶柱层析，甲醇-水（10:90→100:0）梯度洗脱，得到Fr. C₁、Fr. C₂、Fr. C₃、Fr. C₄、Fr. C₅和Fr. C₆等六个部分，Fr. C₃（20~30%甲醇洗脱部分）用半制备高效液相色谱纯化后得到1-羟甲基-β-咔啉；

Fr. D（石油醚-丙酮1:1洗脱部分）经C₁₈反相硅胶柱层析，甲醇-水（5:95→100:0）梯度洗脱，得到Fr. D₁、Fr. D₂、Fr. D₃、Fr. D₄、Fr. D₅和Fr. D₆六个部分；其中Fr. D₄（30~40%甲醇洗脱部分）用半制备高效液相色谱纯化得到1-(β-咔啉-1-基)-3,4,5-三羟基-1-戊酮；

Fr. E（石油醚-丙酮1:1洗脱部分）经C₁₈反相硅胶柱层析，甲醇-水（5:95→100:0）梯度洗脱，得到Fr. E₁、Fr. E₂、Fr. E₃、Fr. E₄、Fr. E₅、Fr. E₆和Fr. E₇七个部分，Fr. E₁（5%甲醇洗脱部分）经LH-20凝胶柱层析用甲醇洗脱，再用半制备高效液相色谱纯化后得到4-(6-甲基吡嗪-2-基)-1,2,3-丁三醇。